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猪链球菌2型(Streptococcus suis 2， SS<,2>)可导致猪脑膜炎、关节炎、败血症、浆膜炎、心内膜炎、多发性关节炎等，是重要的人畜共患病。目前国内外对SS<,2>的研究主要集中在SS<,2>毒力相关因子上，其中公认的毒力相关因子有溶菌酶释放蛋白(muramidase released protein，MRP)、胞外蛋白因子(extracellular factor protein，EF)、溶血素(suilysin)和荚膜多糖(capsular polysaccharide， CPS)等。本实验通过细菌学方法成功分离并鉴定了3株SS<,2>，并根据计算机软件分析选取了MRP和EF抗原性较强的基因片段进行克隆和表达。主要方法和结果如下：
本文通过从广东省多个猪场分离了14株疑似SS<,2>的菌株，经PCR鉴定有3株为SS<,2>阳性。直接涂片镜检和血平板培养观察其大小、形态和培养特性；药敏试验和动物试验观察其耐药性以及致病力情况；生化试验和血清学试验对其进一步鉴定和研究。
参照GenBank中已发表的SS<,2>基因组序列，针对EF和MRP保守序列设计两对特异性引物。以提取的SS<,2>基因组DNA为模板，用PCR的方法成功扩增了MRP全基因组中300～1250的基因序列和EF基因ORF1 1945～2907的基因序列。将PCR 物纯化后克隆到pMD 18-T Simple Vector中，酶切鉴定后进行序列测定，应用 NASTAR分析软件与GenBank上已发表的其它菌株序列进行核苷酸及其推导氨基酸同源性比较，结果表明本菌株MRP基因与其它参考菌株核苷酸序列同源性为99.7％～100％，推导的氨基酸序列同源性介于99.4％～100％之间。而EF基因与其它参考菌株核苷酸序列同源性为96.4％～100％，推导的氨基酸序列同源性介于95.3％～99.7％之间。
将重组质粒pMD-MRP和pMD-EF的双酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)，分别构建MRP和EF基因重组表达质粒pET-MRP和pET-EF。鉴定分析证实重组质粒的正确性后，分别将其转化至BL21中，用IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE和Western Blotting分析，结果表明pET-EF在BL21中能够成功表达，所表达的融合蛋白分子量为50kDa左右，与预期大小相符，并能被EF阳性血清识别；而pET-MRP经过各种条件的摸索后依然不能成功表达。收集pET-EF被诱导表达的菌液，超声破碎菌体，离心后分别收集上清和沉淀，进行SDS-PAGE，结果证明表达产物主要以包涵体形式存在。亲和层析方法纯化表达蛋白，取少量纯化产物进行SDS-PAGE，结果在50kDa处出现清晰单一的特异性蛋白条带，表明表达产物的纯化良好。