【摘 要】
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目的:探究程序性细胞死亡配体1（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）在甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）中的临床意义及其异常表达对甲状腺髓样癌TT细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响,并探究PD-L1与信号转导与转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription
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目的:探究程序性细胞死亡配体1（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）在甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）中的临床意义及其异常表达对甲状腺髓样癌TT细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响,并探究PD-L1与信号转导与转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）的关系,初步了解其在甲状腺髓样癌TT细胞中侵袭转移的机制。方法:1.收集2016年6月～2019年6月在青岛大学医学院附属第四临床医学院（烟台毓璜顶医院）甲状腺外科就诊的MTC患者标本,纳入标准为:临床诊治资料详细、术后标本完整、未出现远处转移且病灶经石蜡病理证实为MTC,符合条件者共36例。应用免疫组化法（immunohistochemistry,IHC）检测36例MTC组织及其癌旁正常甲状腺（CNT）组织中PD-L1蛋白的表达,并分析其与MTC患者临床病理特征间的关系。2.对甲状腺髓样癌TT细胞进行质粒转染,分为:空白对照组（BCG）、NC空载质粒转染组（NEVG）、PD-L1过表达组（POG）、NC si RNA转染组（NSG）、PD-L1低表达组（PLG）。利用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测TT细胞转染前、后PD-L1蛋白的相对表达量;应用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）测定转染后各组TT细胞PD-L1 m RNA相对表达量,检测转染效率。利用划痕实验、Transwell侵袭实验以及CCK-8实验检测PD-L1对不同组别TT细胞相关功能的影响。3.WB测定各组TT细胞中STAT3与磷酸化的STAT3（phospho-STAT3,P-STAT3）蛋白表达情况,初步了解PD-L1与STAT3在TT细胞中侵袭转移的具体机制。结果:1.36例MTC患者中,PD-L1的阳性表达率在MTC组织中为61.11%（22/36）,而其在CNT组织中仅为16.67%（6/36）,统计学差异显著（P<0.001）。统计学发现,36例MTC患者中PD-L1蛋白表达阳性与临床病理特征中出现甲状腺包膜侵犯及颈部淋巴结转移相关（P<0.05）,而与MTC患者的年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期无关（P>0.05）。2.划痕实验、Transwell侵袭实验和CCK-8实验发现:PD-L1可促进TT细胞的迁移能力、侵袭能力及增殖能力。3.WB发现POG中P-STAT3的蛋白表达量较NEVG及PLG明显增加（P<0.05）,而STAT3蛋白总体表达量在转染后各组TT细胞中未见明显差异（P>0.05）。结论:1.PD-L1蛋白在MTC组织中的阳性表达率明显高于CNT组织,其阳性表达与MTC患者发生甲状腺包膜侵犯及出现颈部淋巴结转移有关。2.PD-L1过表达明显促进了TT细胞内STAT3蛋白的磷酸化,同时也增强了TT细胞的迁移、侵袭及增殖能力,其在TT细胞中侵袭转移的机制可能与STAT3通路的激活相关。
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