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六聚组氨酸（6xHis）是一种融合蛋白纯化和检测的常用标签，基于组氨酸与Ni2+螯合作用，Ni-NTA（次氨基三乙酸）、Ni-IDA（亚氨基二乙酸）树脂已被广泛用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化。以羧甲基天冬氨酸（CM-ASP）为螯合配基的Co2+螯合物对六聚组氨酸融合蛋白纯化具有选择性高、金属离子不易脱落等特点。此外，通过抗6xHis抗体纯化六聚组氨酸融合蛋白的方法受到了很多关注。本论文就六聚组氨酸融合蛋白的纯化开展了较为系统的研究，内容包括两个方面：（1）合成了载有羧甲基天冬氨酸钴离子螯合物的树脂并建立了六聚组氨酸融合蛋白的纯化方法。（2）制备了抗6xHis多克隆抗体，并初步将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化。以Sepharose CL-6B为载体，环氧氯丙烷为活化剂，羧甲基天冬氨酸为螯合配基制备载有Co2+的固定化金属螯合亲和层析介质（Co-CM-Asp-Sepharose），将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。优化了200μL细胞裂解液中六聚组氨酸融合蛋白纯化所需介质用量，Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间，介质清洗溶液及靶蛋白洗脱液咪唑浓度等条件。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与商品化Ni-NTA-Agarose（Qiagen公司）两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果。开展了从5mL细胞裂解液中纯化六聚组氨酸融合蛋白CD155D1的研究，并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1的纯化量。结果表明：对200μL细胞裂解液纯化体系，Co-CM-Asp-Sepharose（50％悬浮液）的优选体积为60μL，最佳孵育时间为30min，洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol／L。介质用量放大为1.5mL（50％悬浮液）从5mL细胞裂解液中纯化CD155D1可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比，载有Co2+的固定化金属螯合亲和层析介质具有选择性好，清洗条件简单，得到的靶蛋白纯度高等优点。以碳二亚胺（EDC）介导，将6xHis与载体匙孔血蓝蛋白（KLH）偶联作为免疫原免疫新西兰兔，所得抗血清经饱和硫酸铵沉淀，得到纯度高的抗6xHis多克隆抗体。将多抗通过共价作用固定于氨基末端磁性微粒表面，以磁性微粒为载体通过免疫亲和原理对六聚组氨酸融合蛋白CD155D1的纯化进行了初步研究，结果表明抗6xHis多克隆抗体可用于六聚组氨酸融合蛋白纯化，但效率较低。除去多克隆抗体中针对载体蛋白的抗体是提高纯化效率的一个关键环节，为此，通过免疫亲和法以表面固定KLH的金磁微粒去除多克隆抗体中抗KLH抗体，得到了纯度更高的针对6xHis的抗体，为下一步系统研究6xHiS融合蛋白纯化奠定基础。