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目的：Tudor-SN蛋白是一种细胞内广泛表达的多功能蛋白,其不仅作为STAT6等多种转录因子的共激活因子,而且还参与pre-mRNA剪接加工过程、应激颗粒的形成等。值得注意的是,Tudor-SN蛋白作为RISC的主要组份之一可能参与调控naicroRNAs的表达。此外,Tudor-SN蛋白更被发现存在于分泌细胞的脂滴、内质网等亚细胞器中。Tudor-SN蛋白的这种细胞内多方定位为其生物学功能的发挥提供了前提。近年的研究表明Tudor-SN在多种肿瘤中高表达其中包括乳腺癌,我们实验室的前期研究结果发现其对乳腺癌细胞的生物学行为产生明显的影响,本课题的主要目的是在已有的研究基础上,探讨Tudor-SN在乳腺肿瘤中异常表达存在可能的分子机制,另外,还试图探究TTdor-SN蛋白对脂肪分化的影响以及在其中的作用机制。方法：第一部分：首先利用高通量的microRNA表达谱芯片实验筛查Tudor-SN所调控的miRNAs。在乳腺癌细胞中,根据芯片实验的结果用Stem-Loop PCR方法进一步进行验证,观察Tudor-SN蛋白对miR-127的调控及miR-127的靶基因BCL6的影响,同时用western blotting技术检测转染效率。通过细胞划痕实验和增殖实验观察miR-127过表达对于乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及迁移情况的影响。同时,我们进行体内裸鼠成瘤实验,将Tudor-SN稳定低表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞株接种至裸鼠乳腺脂肪垫,定期观察并测定肿瘤体积变化,并用实时定量PCR测定肿瘤组织中miR-127和BCL6的表达变化。第二部分：将3T3-L1前脂肪细胞转染pSG5-Tudor-SN质粒或针对Tudor-SN的siRNA,然后对其进行三联诱导分化成脂,油红O染色观察Tudor-SN对脂肪细胞形成的影响。在Tudor-SN敲除的MEF细胞里再次验证上述影响。为了探讨Tudor-SN在脂肪分化过程中的作用机制,首先通过、vestern blot和实时定量PCR观察Tudor-SN与分化的关键转录因子PPARγ的蛋白与mRNA水平在3T3-L1细胞分化过程中的变化,同时利用免疫荧光观察两者的定位情况；然后在正常和Tudor-SN敲除的MEF细胞中我们用定量PCR的方法检测了一系列脂肪分化过程中的关键转录因子和脂肪因子的变化。通过虫荧光素酶实验和ChIP实验我们检钡Tudor-SN启动子区在脂肪分化过程中的转录调控情况。为了检测两个蛋白是否存在相互作用,我们分别用体外和体内的GST融合蛋白钓取技术和免疫共沉淀实验进行验证并确定两者结合的片段。结果：第一部分：Tudor-SN蛋白能够调控多种miRNAs的表达,Tudor-SN抑制导致14个miRNAs表达上调和7个表达下调,miR-127是其中上调的miRNAs之一。在乳腺癌细胞中,Tudor-SN蛋白负性调控miR-127的表达进而使miR-127的靶基因BCL6上调。miR-127的过表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和增殖。体内裸鼠成瘤实验表明Tudor-SN抑制促使miR-127上调及miR-127的靶基因BCL6降表达。第二部分：过表达Tudor-SN蛋白分化的脂肪细胞增多,抑制Tudor-SN蛋白表达或敲除则成脂减少或分化阻滞。Tudor-SN与PPARy在脂肪分化过程中的蛋白表达变化一致,两者mRNA的表达不一致。此外,两者在成脂前后的细胞内定位也存在一致性变化并在成脂的细胞核内存在共定位现象。Tudor-SN敲除导致PPARy的靶基因aP2, adipsin, LPL, adiponectin和CD36明显下调甚至缺如,而PPARy及其上游的转录因子或脂肪因子C/EBPa, β和δ, SREBP1及其靶基因FAS, SCD2等上调。在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,Tudor-SN受转录因子C/EBPβ的转录调控。1udor-SN蛋白通过其SN结构域与PPARy蛋白发生相互作用。结论：1、Tudor-SN蛋白能够调控多种miRNAs的表达,miR-127是其中下调的miRNAs之一。体内外实验表明1Tudor-SN蛋白负性调控miR-127进而正向调控miR-127的靶基因BCL6表达,同时miR-127的过表达抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖,与Tudor-SN抑制后观察的细胞表型变化一致,因而Tudor-SN蛋白通过miR-127依赖的方式上调促癌因子BCL6的表达进而促进乳腺癌的进展。2、Tudor-SN蛋白对脂肪细胞的分化影响具有促进作用。Tudor-SN与脂肪分化的关键转录因子PPARγ在脂肪分化过程中的蛋白表达变化和成脂前后的胞内定位变化呈一致性,在成脂细胞的胞核内存在共定位。体内外实验表明Tudor-SN蛋白通过其SN结构域与PPARγ蛋白发生相互作用,两者间的相互作用不依赖于诱导剂刺激。Tudor-SN敲除导致PPARγ及其上游的转录因子或脂肪因子反馈性上调,而PPARγ的靶基因明显下调甚至缺如。在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,Tudor-SN受转录因子C/EBPP的转录调控。