背景肺癌是人体最常见的恶性肿瘤之一,随着工业的进步、大自然环境的污染和人口的老龄化,近些年来肺癌的发病率和死亡率逐渐升高,现在在多数发达国家肺癌已成为了恶性肿瘤的第一位,这与工业的发展、环境污染和人口老龄化有关。现在肺癌的早期发现和治疗已成为了全球关注的问题。根据世界卫生组织癌症研究所2010年发布的癌症报告示:2009年肺癌新发病例约为171万,死亡约140万。现在在我国的肺癌发病率和死亡率分别居恶性肿瘤的第一位和第二位。其中的多数患者发病时的年龄超过了四十岁,而且统计显示近些年来女性患者发病率不断上升,发病的男女比例由以前的4:1上升到了现在的1.5:1。肺癌的发病原因很复杂,目前的流行病学研究显示主要与环境污染、吸烟和职业因素等有关。这些因素作用于基因,导致基因突变。现已查明肺癌中有多种抑癌基因失活或癌基因突变。在细胞中抑癌基因的失活和癌基因的突变可以导致恶性肿瘤细胞增殖的能力增强。并且恶性肿瘤细胞增殖时可以重叠生长,恶性肿瘤细胞的接触性抑制消失,细胞能向三维空间生长,形成层状堆积物。现在肺癌的治疗手段主要有手术、化疗、放疗和生物治疗等。据回顾性研究发现虽然现在手术仍然治是疗肺癌最有效的手段,但是肺癌早期没有任何的外部表现症状,在患者出现外部表现症状去医院就诊时,很多患者已进入了中后期,错过了通过手术治疗肺癌的最佳时期。由于恶性肿瘤是在基因水平引起的一种疾病,因此恶性肿瘤的靶向治疗已成为现今研究的一个热点。Hippo信号传导通路最早是由于果蝇Ste20样激酶Hippo而命名的信号传导通路。Hippo通路的主要生物学功能有:调控细胞的分化和器官大小,维持细胞凋亡增殖的动态平衡,维护人体内环境稳定,调节细胞的接触性抑制,并且可以导致恶性肿瘤的发生。在人体内,Hippo通路也参与细胞增殖的负调控,YAP磷酸化后是抑制转录的关键因子。最近有些实验表明YAP是一个癌基因,可以促使正常细胞向恶性肿瘤细胞方向分化,例如YAP m RNA和YAP蛋白在胰腺癌细胞、肝癌细胞以及结肠癌细胞中的表达明显上调。YAP是Hippo信号传导通路下游的关键效应分子,YAP可以抑制恶性肿瘤细胞的凋亡,增强恶性肿瘤细胞的增殖能力,并且可以使恶性肿瘤细胞的接触性抑制能力消失。但是在某些情况下YAP作为促癌因子促进恶性肿瘤发生的时候,还具有促进凋亡的能力。例如当DNA受损伤时,PML可使YAP及p73蛋白进入细胞的细胞核内,对转录激活因子有辅助作用,同时YAP可以增强与p73相关的凋亡基因的转录和翻译。另外,有人在研究乳腺癌细胞时发现,乳腺癌细胞中的YAP表达明显下调甚至缺失,并且乳腺癌细胞中的YAP缺失可以导致更强的浸润和转移能力。所以有些研究者表示YAP作为癌基因的角色需要重新的定位。本实验首先对手术患者正常的肺组织和肺腺癌组织用免疫组化检测YAP的定位,以了解YAP蛋白在正常的肺组织和肺腺癌组织中的表达情况,然后构建YAP干扰质粒并用构建的干扰质粒干扰YAP基因的表达,最后用CCK8和Transwell小室来检测肺腺癌细胞在增殖和侵袭能力方面的改变。以探讨相关作用机制,寻找肺腺癌治疗的新靶点。目的检测正常的肺组织和肺腺癌组织中YAP蛋白的表达情况,构建YAP+sh RNA干扰质粒然后对肺腺癌细株A549进行转染,检测YAP对肺腺癌细胞株A549的生物学行为的影响,以寻求肺腺癌靶向治疗的新靶点。方法1.运用免疫组化来检测YAP蛋白在肺腺癌组织和正常组织中的表达情况。2.根据信息资源检索,然后根据位点,设计出4个sh RNA质粒载体(sh RNA1,sh RNA2,sh RNA3,sh RNA4)和一个阴性对照的质粒载体(NCRNA),运用脂质体转染肺腺癌A549细胞株,在荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达情况,然后采用有限稀释法建立起稳定低表达YAP基因的肺腺癌A549细胞系,运用RT-PCR和western-blot来检测YAP在该细胞中的表达情况。3.最后运用CCK8和Transwell小室来检测各组细胞株中的增殖能力和侵袭能力的情况。结果YAP蛋白在肺腺癌组织中高表达,YAP蛋白在正常肺组织中不表达或者低表达。用荧光显微镜、RT-PCR和western-blot可显示细胞转染成功且可以挑出转染效率最优的细胞株。采用CCK8和Transwell小室检测到转染后的细胞株与肺腺癌A549细胞株相比较,增殖能力和侵袭能力有所下降。结论肺腺癌组织与正常肺组织相比较,肺腺癌组织中YAP蛋白表达高。构建成功的YAP+sh RNA干扰质粒可以降低肺腺癌A549细胞系中YAP蛋白的表达量,从而可以使肺腺癌A549细胞系的增殖能力和侵袭能力降低。