【摘 要】
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本文以呼伦贝尔黄花苜蓿为研究材料,根据本项目组前期耐牧性状转录组测序差异表达基因的序列信息,设计特异引物,利用PCR技术克隆得到黄花苜蓿β-氨基己糖苷酶基因,对该基因进行了序列特征分析,并采用RT-PCR技术研究了该基因的表达特征,利用农杆菌介导法将其转化烟草,为进一步研究该基因的功能特征奠定基础,研究结果如下:1、克隆得到1个黄花苜蓿β-氨基己糖苷酶基因Mfβ-Hex1,该基因cDNA全长786
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本文以呼伦贝尔黄花苜蓿为研究材料,根据本项目组前期耐牧性状转录组测序差异表达基因的序列信息,设计特异引物,利用PCR技术克隆得到黄花苜蓿β-氨基己糖苷酶基因,对该基因进行了序列特征分析,并采用RT-PCR技术研究了该基因的表达特征,利用农杆菌介导法将其转化烟草,为进一步研究该基因的功能特征奠定基础,研究结果如下:1、克隆得到1个黄花苜蓿β-氨基己糖苷酶基因Mfβ-Hex1,该基因cDNA全长786bp,包含了675bp的开放阅读框。编码了224个氨基酸,主要由谷氨酸,缬氨酸,亮氨酸等组成。与豆科植物蒺藜苜蓿和大豆中的β-Hex基因具有高度同源性分别为97.31%和88.34%。Mfβ-HHex1基因属于糖苷水解酶GH20家族成员,不具有跨膜结构,不含信号肽,其二级结构以a-螺旋为主。该基因蛋白为不稳定蛋白。亚细胞定位在细胞质中。2、Mfβ-Hex1基因的表达量与黄花苜蓿耐牧性强弱有关,耐牧性强的植株高于耐牧性弱的植株,且在不同器官中Mβ-Hex1的表达量也不同,表达量高低依次为叶>根>茎。3、本研究构建了pCHF3-Mfβ-Hex1良物表达载体,并用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因烟草。4、表达分析得到Mfβ-Hex1在经过刈割处理后的转基因烟草中上调表达,且Mfβ-Hex1的表达量上调达到显著水平。转基因烟草中Mfβ-Hex1基因表达量在不同器官中表达量高低依次为叶>根>茎。
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