肿瘤组织微血管的新生在肿瘤侵袭转移中扮演着重要的角色，随着临床新兴出现的血管生抑制剂用于临床肿瘤的治疗，有关肿瘤血管新生相关因子的分子生物学研究日益受到重视。EFEMP1(epidermal growth factor-containing fibulin-likeextracellular matrix proteins)也叫fibulin-3,属于fibulin基因家族相对分子质量约50×103(kd)蛋白，并被证实是一个与血管新生有关的细胞外基质蛋白。最初发现它由于存在R345W突变，沉积于视网膜色素上皮细胞内质网，从而刺激VEGF的表达，引起血管的增生从而导致脉络膜黄斑变性疾病，但它在肿瘤中的作用报道甚少且结果不一。较早研究结果显示，在肺癌组织中，fibulin-3由于启动子甲基化而导致表达降低，在体外EFEMP1有拮抗肿瘤血管生成作用。随后有报道提出，EFEMP1作为血管生成拮抗剂，由于基因异常甲基化而低表达于乳腺癌组织中，且这种低表达与患者预后不良有关。另一方面，有最新的研究表明，EFEMP1的表达在体外促进了胰腺癌的生长和VEGF的表达，导致CD31(+)的微血管数量增加。鉴于此不相一致的实验结果，有学者提出EFEMP1的表达可能因不同组织学起源的肿瘤而发挥不同的生物学作用。　　 子宫颈癌是女性高发高侵袭性的恶性肿瘤，那么在子宫颈癌组织中EFEMP1的表达情况如何以及它与肿瘤的微血管生成的关系究竟如何?本研究首先通过检测临床子宫颈癌组织中的表达情况，探讨EFEMP1的表达与子宫颈癌血管生成以及生物学行为的关系；进而在细胞水平上探讨EFEMP1影响子宫颈癌血管生成的可能机制；最后在动物肿瘤模型实验水平证实EFEMP1对子宫颈癌生长的影响。　　 第一章子宫颈癌组织中EFEMP1的表达对子宫颈癌微血管形成及生物学行为的影响　　 目的：探讨EFEMP1在子宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌的微血管生成和生物学行为的关系。　　 方法：于100例临床子宫颈癌标本和10例宫颈炎正常上皮对照组织中，采用免疫组化MaxivisionTM方法检测EFEMP1的表达，并采用原位杂交方法检测其中VEGF mRNA的表达。用CD34组化标记微血管内皮，以计数各个样本组织中微血管密度(microvascular density，MVD)。结合各病例的临床病理参数，分析EFEMP1蛋白的表达与宫颈癌生物学行为的关系，并对EFEMP1表达与VEGFmRNA表达和MVD之间进行相关性分析，以初步探讨EFEMP1与宫颈癌微血管生成的关系及其可能机制。　　 结论：(1)EFEMP1高表达于宫颈癌组织中，并与宫颈癌淋巴结转移和脉管浸润有关；(2)EFEMP1可能通过上调宫颈癌VEGF的表达而促进宫颈癌微血管的增生；(3)EFEMP1的高表达与宫颈癌的预后不良有关，可视为独立的预后不良因素。　　 第二章 EFEMP1对子宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力、VEGF表达及其对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力影响的研究　　 目的：研究EFEMP1蛋白对子宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力、VEGF表达及其对人脐静脉内皮细胞生长、迁移和管腔形成能力的影响　　 方法：不同浓度人工重组EFEMP1蛋白作用宫颈癌Hela细胞后，MTT法检测EFEMP1对Hela细胞增殖能力的影响：不同浓度人工重组蛋白EFEMP1蛋白作用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，同时用不同浓度的VEGF因子处理HUVECs做内对比，用MTT法检测两种作用因素处理后HUVECs生长增殖情况。Transwell小室法检测EFEMP1对Hela侵袭能力的影响以及对HUVECs迁移能力的影响。采用Rose Bengal活细胞染色法，检测EFEMP1对Hela细胞与HUVECs之间黏附力的影响。通过Matrigel胶体外内皮细胞管腔形成能力实验，观察EFEMP1对HUVECs体外管腔形成能力的影响。用阳离子脂质体介导的转染方法，通过转染真核表达载体pCMV6质粒，将EFEMP1基因瞬时导入宫颈癌Hela细胞，转染后继续培养细胞48h，取细胞上清液，采用夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测宫颈癌细胞上清液中VEGF表达，以检测EFEMP1基因转染对Hela细胞VEGF表达的影响。　　 结论：(1)EFEMP1能促进宫颈癌细胞的生长、浸润和VEGF表达；(2)EFEMP1对内皮细胞的生物学功能无直接影响；(3)EFEMP1提高宫颈癌血管生成活性可能是通过其提高宫颈癌VEGF表达水平的途径实现，而不是通过直接影响内皮细胞功能的途径实现。　　 第三章 EFEMP1基因转染对子宫颈癌生长影响的研究　　 目的：探讨EFEMP1基因转染对裸鼠实验性子宫颈癌的生长的影响。　　 方法：：通过阳离子脂质体介导的转染方法，利用真核表达载体pCMV6质粒，将EFEMP1基因导入宫颈癌Hela细胞，经抗生素G418筛选获得抗性克隆，逆转录聚合酶链式反应(PR-PCR)检测转染后宫颈癌细胞中EFEMP1基因的表达，并通过免疫蛋白印迹技术(western-blot)检测转染后宫颈癌细胞中EFEMP1蛋白的表达情况，以验证转染效果。BALB/c雌性裸鼠9只，5～7周，SPF条件饲养，随机分为3组，每组3只。将转染EFEMP1基因的Hela细胞(Hela-EFEMP1)、转染空质粒载体的阴性对照组细胞(Hela-vector)和正常Hela细胞分别接种于3组裸鼠皮下，以构建宫颈癌裸鼠荷瘤模型。待成瘤后，隔日观察3组肿瘤的生长情况，并于接种后的第30天处死裸鼠，称取肿瘤重量并取材。将各组取下的肿瘤组织固定、包埋、切片，利用免疫组化MaxvisionTM法检测各组的肿瘤组织中EFEMP1、VEGF蛋白表达情况，并用CD34标记各组肿瘤中微血管内皮细胞计数微血管密度，以作比较分析。　　 结论：(1)成功构建了体外实验性裸鼠子宫颈癌模型；(2)EFEMP1能够促进在体宫颈癌组织的生长，其机制与EFEMP1促进宫颈癌VEGF表达进而提高子宫颈癌血管生成能力有关。