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目的:中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是早期诊断和预测急性肾损伤(AKI)的标志物,而且调控多种肿瘤的发生发展。但目前针对NAGL的检测项目并未在临床上广泛开展,也没有以NGAL为靶点蛋白研发的抗肿瘤药物。核酸适配子是一类高特异性高亲和力结合靶标的单链DNA或RNA,在诊断和治疗中广泛应用。本研究拟通过磁珠SELEX,筛选与NGAL高特异性高亲和力结合的核酸适配子,一方面用于建立可广泛推广、简便低廉用于临床诊断的酶联适配子分析(ELAA)检测方法;另一方面,初步探索NGAL特异性核酸适配子能否调节肿瘤细胞的恶性增殖,为抗肿瘤药物研发提供一个新思路。方法:(1)通过磁珠SELEX筛选NGAL特异性核酸适配子,生物信息学方法对适配子进行序列同源性分析和二级结构预测,qPCR法验证比较候选适配子及适配子对NGAL的特异性和亲和力。(2)选取最优适配子A53替换ELISA中的第二个抗体,建立ELAA检测方法,并进行性能评价,包括特异性、线性范围、灵敏度、精密度、准确性及临床样本检测。(3)通过免疫荧光验证A53与食管鳞癌细胞KYSE45表达的NGAL的特异性结合,克隆形成实验和CCK-8增殖实验探索A53对食管鳞癌细胞KYSE45增殖的影响。结果:(1)通过8轮磁珠SELEX筛选和qPCR法验证,获得3个特异性结合NGAL的适配子 A36、A42、A53,其 Kd 值分别为 43.59nM、66.55nM、32.52nM。(2)ELAA检测方法性能验证结果:可以特异性检测NGAL,线性范围为125ng/mL-4000ng/mL,灵敏度为30.45ng/mL,板内和板间变异系数CV值均小于15%,回收率在80%-110%之间,对临床样本检测表明AKI患者尿NGAL水平显著高于正常健康体检者(P<0.001)。(3)免疫荧光结果:A53能特异性结合NGAL。克隆形成实验和CCK-8增殖实验结果:与对照组相比,加入FAM-A53后,食管鳞癌细胞KYSE450增殖能力均明显降低(P<0.05)。结论:(1)获得高特异性高亲和力结合NGAL的适配子:A36、A42、A53。(2)建立的ELAA检测方法可以适用于临床检测NGAL。(3)适配子A53可特异性结合NGAL且具有抑制食管鳞癌细胞KYSE450增殖的作用。