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本文以虎眼万年青和刺五加为原料,对虎眼万年青多糖和刺五加多糖的提取、分离纯化、理化性质、结构的初步分析、抗氧化活性和免疫活性等方面进行了较为系统的研究。得到结论如下:
⑴采用回流提取、超声提取、超声酶解提取、微波辅助提取虎眼万年青多糖,优化出回流提取最优工艺条件为:溶剂原料比为12 mL/g、提取时间3 h、提取次数3次、提取温度80℃;超声提取最优工艺条件为:提取时间为60min、超声次数为3次、超声功率为400W、溶剂原料比为40mL/g;超声酶解法提取工艺条件为:复合酶中纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶的最佳配比为:9:120:10。超声酶解提取最优参数为:提取温度50℃、提取时间90min、酶解pH 4、提取3次;微波辅助提取最优工艺条件为:提取温度为140℃,溶剂原料比40mL/g,提取时间为5 min,提取次数3次。
虎眼万年青经超声提取、乙醇沉淀分级、Sevag法脱蛋白、脱色、透析去除小分子及盐类物质,得到虎眼万年青粗多糖;粗多糖采用EDAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱分离纯化,得到OCAP-1、OCAP-2、OCAP-3、OCAP-4、OCAP-5五个多糖组分,其中高得率、高活性的OCAP-3经Sephadex G-75凝胶过滤柱色谱进一步分离纯化,得到虎眼万年青单一多糖OCAP-3-0。利用气相色谱和毛细管电泳法测定OCAP-3-0主要由木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖四种单糖组成,高效液相凝胶色谱法测得其分子量为27300Da,硫酸-咔唑法测得其糖醛酸含量为5.78%,红外光谱显示其具有多糖的特征吸收峰。抗氧化活性实验结果表明,虎眼万年青各多糖组分均具有抗氧化作用,对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH.都有较强的清除活性,其清除率随着多糖浓度的增加而增加。对脾细胞增殖的影响结果显示,虎眼万年青各多糖组分(OCAP-1、OCAP-2、OCAP-3、OCAP-4、OCAP-5、OCAP-3-0)与空白对照组比较,各多糖组分对脾细胞增殖均具有一定的促进作用;与ConA对照组比较,除了OCAP-1,其余多糖组分对脾细胞增殖都有显著性促进作用
⑵采用超声提取、超声复合酶解提取、高压蒸煮提取刺五加多糖,优化出超声提取最优工艺条件为:提取温度为70℃,提取时间为90min,超声功率为500W,提取次数为3次;超声酶解法提取工艺条件为:纤维素酶1.5%,果胶酶1.5%,木瓜蛋白酶为0.5%;超声酶解提取最优参数为:取温度为70℃,提取时间为30min,溶液pH值为7,超声功率为500W;高压蒸煮提取最优工艺条件为:提取温度为120℃,提取时间为60min,溶剂原料比20mL/g,提取次数3次。
刺五加经超声酶解提取、乙醇沉淀分级、Sevag法脱蛋白,脱色,透析去除小分子及盐类物质,得到刺五加粗多糖;粗多糖采用 EDAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱分离纯化,得到ASP-1、ASP-2、ASP-3,其中高得率、高活性ASP-2经Sephadex G-75凝胶过滤柱色谱进一步分离纯化,得到刺五加单一多糖ASP-2-0.气相色谱测定ASP-2-0主要由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、果糖、葡萄糖、半乳糖六种单糖组成,高效液相凝胶色谱法测定其分子量为13600Da,硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量为7.45%,红外光谱图显示其具有多糖的特征吸收峰。抗氧化活性测试表明,刺五加多糖各组分均具有抗氧化作用,对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH.都有较强的清除活性,其清除率随着多糖浓度的增加而增加。对脾细胞增殖的影响实验结果显示,刺五加各多糖组分(ASP-1、ASP-2、ASP-3、ASP-2-0)与ConA对照组比较,各多糖组分对脾细胞增殖都有显著性促进作用。