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研究背景及目的:法医学研究领域中,死亡时间(Postmortem interval,PMI)的推断一直以来都是法医学者们致力研究的重点。随着分子生物信息学技术的飞速发展,有关法医病理学方面的研究逐渐向分子生物信息学领域迈进,近几年已取得了可喜的研究成果。近年来刑事犯罪案件频繁发生,且作案手段千变万化,法医实践人员面对的环境异常复杂,影响检验因素众多,故寻求更科学更灵敏的可检测指标成为目前法医界亟待解决的难题。实践中,虽然皮肤等表层器官一直被认为是法医人员检验取材的首选,但在一些腐尸、碎尸案中,方便取材的器官因众多外界因素大部分已经失去了检测价值,然而心脏是机体内器官中尸体腐败后保存相对完整的。近几年越来越多的专家致力于心脏器官的研究,临床医学专家已研究证实,肌红蛋白(Myoglobin,Mb)可高灵敏性的反应心肌损伤情况,可作为急性心肌梗死(AMI,Acute myocardial infarction)早期的诊断,有很大的临床应用价值。但目前关于Mb的研究大多集中在临床疾病治疗方面,法医学界对此研究较少。Mb是一个携氧低分子呼吸性蛋白质,心肌含量极为丰富,主要为组织摄取和贮存氧。法医学工作中时常会遇到碎尸等方面的案件,鉴于法医工作者的实践需要,本实验通过动物实验模型,完全随机独立分组,提取大鼠心肌组织,利用RT-PCR技术检测大鼠死后心肌Mb mRNA在体与离体两种状态下各相应时间段的降解程度和其规律性,期望找到一种更为科学有效的推断PMI的方法。方法:在本实验中我们取健康清洁SD大鼠100只(重庆医科大学实验动物中心提供),重量为220g～240g,雌雄不限,按照大鼠心肌组织原位体内处理和取出离体后处理两种方式随机独立分为两个实验组:在体实验保存组和离体实验保存组,每个实验组又分为0h、lh、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72 h, 10个时间组,每组5只,大鼠断颈处死后立即置于(25±1)℃,65%～70%温湿度控制系统中,严格依照实验设计进行操作。利用perimer 5.0软件设计PCR引物,总RNA提取试剂盒提取RNA,RT-PCR试剂盒对RNA进行逆转录、扩增,得到产物,电泳分离,于凝胶成像仪器上记录成像,并采用spss17.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:利用RT-PCR技术逆转录Mb mRNA,扩增,在琼脂糖凝胶上显示电泳条带,于凝胶成像仪上观察记录结果如下:(1)在体实验保存组与离体实验保存组Mb mRNA均随着死亡时间的延长逐渐降低,呈时序变化。(2)在体实验保存组Mb mRNA到死后72小时时已检测不出;而离体实验保存组到24小时后就已检测不出。(3)在体实验保存组和离体实验保存组两种状态下Mb mRNA的降解情况比较,离体组降解速度要更快一些。结论:利用RT-PCR技术检测死后大鼠心肌Mb mRNA的降解情况,通过spss17.0统计学软件分析得出结论如下:(1)死后大鼠心肌Mb mRNA降解呈时序性变化,随着死亡时间的延长逐渐递减,可作为PMI的一个检测指标。(2)研究发现Mb只在前24小时内有明显的降解趋势,在24小时至72小时则无明显变化,故此指标更适宜于PMI的早期推断。(3)Mb mRNA的降解呈时间相关性,但在体与离体条件下的降解规律并不是完全一致。