活性蛋白饲料优良菌株的筛选

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丝状真菌是各种复杂有机物,尤其是数量最大的纤维素、半纤维素和木质素的主要分解菌,且具有分布广泛,易于生长等特点,因此应用范围也比较广泛,如生产传统食品酱油、干酪等;生产有机酸、酶制剂、真菌多糖、植物激素等。本文主要是利用丝状真菌的此特点来降解果渣,生成酵母菌可以利用的小分子有机物,从而生产高活性蛋白饲料。本文通过研究了26株丝状真菌的滤纸酶、木聚糖酶、淀粉酶、果胶酶、蛋白酶酶活,筛选出10株产酶活性高的优良菌株并对该10株真菌降解果渣效果进行了定量研究;同时还对实验室已有的酵母菌进行了筛选,并对筛选得到的真菌和酵母菌进行了鉴定和其他生物特性进行了研究;进而将筛选到的真菌与酵母菌混合发酵果渣,通过测定发酵产物中粗蛋白、纯蛋白、游离氨基酸、多肽含量来获得可以高产活性蛋白饲料的菌株组合。通过研究最终得到了以下结果:(1)丝状真菌的筛选:菌株Z-7除果胶酶之外的四种酶酶活性都较高;菌株RutC30、13003滤纸酶、木聚糖酶、蛋白酶三种酶酶活性较高;Z-9、Sn27滤纸酶、木聚糖酶、果胶酶三种酶酶活性较高; Z-5淀粉酶、蛋白酶;114-2淀粉酶、果胶酶;426A滤纸酶、果胶酶酶活性较高;Z-4、Qm9414仅木聚糖酶酶活性较高。菌株Qm9414、RutC30、114-2降解纤维素效果较好;菌株426A、Z-5、Sn27降解半纤维素效果良好;菌株RutC30、426A、Z-9降解淀粉类物质效果较好;菌株13003、Qm9414、Z-7则对果胶的降解效果良好;菌株RutC30、Z-7、13003对蛋白质的降解效果则最佳。因此,上述10株菌作为实验供试菌株。(2)优良酵母菌的筛选:通过对发酵产物中粗蛋白、纯蛋白、游离氨基酸、可溶性蛋白4项测定指标的分析结果,得出接种啤酒酵母、1314、1410与黑曲霉A8时发酵产物中粗蛋白含量较对照增加39.012%、38.473%、34.773%;纯蛋白含量较对照增加77.023%、149.404%、65.254%;游离氨基酸较对照增加281.746%、821.429%、678.571%;可溶性蛋白较对照增加114.856%、107.895%、60.268%;因而选择1314、1410、啤酒酵母3株酵母菌作为实验供试菌株。(3)丝状真菌、酵母菌的鉴定及生物学特性的研究:a.结合菌株菌落形态、显微形态及分子鉴定结果,菌株Z-4为翘孢霉(Emericella sp.),菌株Z-5为米曲霉(Aspergillus oryzae),菌株Z-7为黄曲霉(Aspergillus flavus),菌株Z-9为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)。b.10株真菌、3株酵母菌的最适温度为30~40℃;10株不同真菌的最适pH范围较广:4.5~8.5;而3株酵母菌的最适pH范围则较窄:4.5~5.5;3株酵母菌都是兼性厌氧微生物;10株丝状真菌其耐受盐的能力都较高,最低的氯化钠浓度也达到了10g/mL;3株酵母菌对盐的耐受力则较低,最高的氯化钠浓度仅为20g/mL;最低的氯化钠浓度仅为1g/mL。(4)果渣发酵效果的研究:通过10株丝状真菌与3株酵母菌的30种不同组合发酵果渣后的发酵产物中粗蛋白、纯蛋白、游离氨基酸、多肽含量筛选出可生产高活性、高蛋白的微生物饲料的优良菌株组合:Z-7+1314、Z-9+1314、Sn27+1314、114-2+啤酒酵母、426A+1410,其粗蛋白含量为224.579~293.240g/kg,接菌引起的增率为31.506%~71.712%;纯蛋白含量为157.206~208.851g/kg,接菌引起的增率为80.722%~140.093%;游离氨基酸含量为0.330~0.724g/kg,接菌引起的增率为7.273%~119.273%;多肽含量为22.000~47.100g/kg,接菌引起的增率为7.272%~114.091%。
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