虾池微囊藻毒素变化规律及对南美白对虾毒性作用机制研究

来源 :中国计量大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:yyxu123
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蓝藻水华在虾池中频频发生已成为当前南美白对虾(Litopenaeus Vannamei)养殖面临的突出问题,其产生的微囊藻毒素(microcystins,MCs)可致使南美白对虾发病减产。本研究以南美白对虾半集约化养殖水体和虾样为研究对象,分析不同养殖时期虾池微囊藻毒素的变化规律及影响因素,探究其对南美白对虾的毒性作用机制,主要结果如下:1.养殖期间,虾池中的微藻群落主要由蓝藻、绿藻、硅藻、隐藻、甲藻、裸藻等6门43属组成,其中绿藻和蓝藻的种类最为丰富。水体中蓝藻、产毒微囊藻微囊藻毒素含量与盐度、NH4-N、NO3-N、NO2-N、PO4-P等水质理化因子的变化规律基本相似,都呈现放苗后显著增加而后减少,养殖中后期再次显著增加的变化趋势,pH值基本呈相反的变化趋势。相关性分析和显著性检验结果显示:水体中蓝藻、产毒微囊藻含量与NH4-N、NO3-N、NO2-N、PO4-P含量极显著正相关(P≤0.01),与盐度显著正相关(P≤0.05),与pH值显著负相关;微囊藻毒素浓度与盐度、NH4-N、NO3-N、NO2-N含量显著正相关(P≤0.05),与PO4-P极显著正相关(P≤0.01),与pH值极显著负相关(P≤0.01)。2.改良寇氏法测定水体微囊藻毒素MC-LR、MC-RR对南美白对虾半数致死浓度分别是123.21μg/kg、141.48μg/kg。以该浓度注射南美白对虾后,肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化物酶(POD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)等氧化应激酶类活力显著提高以清除活性氧,应对氧化应激所造成机体损伤,MC-LR对相关应激酶的影响相对较大。3.MC-LR、MC-RR处理0-72 h内南美白对虾血浆血蓝蛋白含量均呈峰值变化,处理8 h达到最大值,血蓝蛋白mRNA和酚氧化酶基因表达量呈现相似的变化趋势。由此说明,MC-LR、MC-RR可诱导南美白对虾血蓝蛋白合成增加,并且血蓝蛋白可能由于其酚氧化酶活性,参与了机体的免疫反应。在酚氧化酶原系统激活应对微囊藻毒素侵染的同时,丝氨酸蛋白酶抑制因子serpin基因表达量也显著上调,有效的调控酶原激活系统。4.南美白对虾经注射MC-LR、MC-RR急性染毒后,其肝胰腺组织石蜡切片镜检显示肝小管排列比较整齐,边界比较清晰,但肝小管管腔扩大,不规则,细胞出现空泡化,显微镜下可见坏死的细胞核、残余的组织散落在肝小管间隙。流式细胞分析结果显示MC-LR、MC-RR注射16 h后,注射组较对照出现明显的细胞凋亡现象,注射24 h后,活细胞群落与凋亡群落分界并不分明,细胞群落出现向凋亡区间飘移,出现大量细胞凋亡。5.MC-LR、MC-RR均能诱导肌肉生长抑制素基因MSTN表达量上调,抑制正调控肌肉生长的核糖体蛋白L18基因RpL18与蜕皮激素相关基因E75表达,以及抑制表达,影响南美白对虾的肌肉生长及蜕皮过程。MSTN基因对MC-LR的响应水平相对较高,RpL18基因、E75基因对MC-RR的响应水平相对较高。
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