目的:探讨体外不同负压对于骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)表皮分化的影响。方法:1.采用密度梯度离心法分离培养4-6月龄新西兰大白兔BMSCs;2.培养至第三代BMSCs进行鉴定:倒置显微镜对细胞进行形态学观察,间充质干细胞的三系分化鉴定,流式细胞仪鉴定细胞表面标志物;3.设置实验组,分别是0mmhg组(对照组)、50mmhg组、100mmhg组、200mmhg组,诱导时间为30min/h;4.负压下常规培养第三代BMSCs,分别于1d、3d、5d和7d进行细胞计数绘制细胞生长曲线,于3d、5d和7d使用CCK8检测细胞增殖情况;5.诱导BMSCs向表皮细胞分化,使用免疫荧光法检测BMSCs向表皮细胞分化诱导的结果;6.负压条件下诱导BMSCs向表皮细胞分化14d后,RT-PCR检测CK5、CK10m RNA的表达,western-blot检测广谱角蛋白的表达情况。结果:1.倒置显微镜下可见原代BMSCs呈鱼群样、漩涡样生长,另可见大量淋巴细胞与血细胞,第三代BMSCs呈规则长梭形,杂细胞较少;2.第三代BMSCs可向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化;3.第三代BMSCs高表达骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44,不表达骨髓造血干细胞表面抗原CD34;4.随着负压的逐渐增高,细胞的增殖能力逐渐受抑制,细胞生长曲线及CCK8实验在第7d时,四个组比较两两比较均有统计学意义;5.随着负压的逐渐增高,表皮样细胞CK5、CK10m RNA的表达逐渐增高;6.随着负压的逐渐增高,表皮样细胞广谱角蛋白的表达逐渐增高。结论:随着负压增高,BMSCs向表皮分化的能力逐渐增强,但是细胞增殖能力逐渐受抑制。