1目的本研究旨在探讨类风湿关节炎与动脉粥样硬化相关性,以及研究新风胶囊对其引发的心脏病变的作用机制,为降低类风湿关节炎患者发生心血管事件提供治疗思路,为中医药治疗类风湿关节炎心脏病变提供临床理论依据。2方法2.1理论研究搜集、整理并阅读大量相关文献,阐述类风湿关节炎致动脉粥样硬化以及心脏病变三者之间的关系,阐述相关研究现状,表明研究类风湿关节炎与动脉粥样硬化相关性及其致心脏病变的重要性。2.2临床研究对2013年9月至2014年9月在安徽省中医院风湿病科诊治的60例类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者进行研究,并设60例健康体检者作为对照组进行研究,健康体检者均来自安徽省中医院健康体检中心。研究对象均统计年龄、性别、吸烟、绝经,检测血压(BP)、体重指数(BMI)等临床指标;采用GE Vivid-7彩色超声诊断仪测定颈动脉内-中膜厚度(IMT)、斑块;采用多普勒超声血流探测仪检测踝肱指数(ABI);采用酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测血管活性因子前列环素(PGI2)、血栓素(TXA2);采用全自动生化仪检测血脂指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);采用全自动生化仪检测红细胞沉降率(ESR)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、类风湿因子滴度(RF)、免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白A(Ig A)、免疫球蛋白M(Ig M)、抗环瓜氨酸抗体(CCP)等相关实验室指标;并观察RA患者关节症状体征、中医证候积分、生活质量、HAQ、焦虑(SAS)、抑郁(SDS)等积分值。采用SPSS19.0统计软件包,比较RA组及正常组动脉粥样硬化指标,分析指标间相关性。2.3实验研究将50只大鼠随机分为正常组(NC组)、模型组(MC组)、新风胶囊组(XFC组)、甲氨喋呤组(MTX组)和雷公藤多苷片组(TGT组),每组10只。适应性喂养一周后,除正常组外,其余各组大鼠右后足趾皮下注射弗氏完全佐剂0.1ml致炎,复制佐剂性关节炎大鼠(AA大鼠)模型。致炎后第19天开始给药,各组连续给药30天。观察各组大鼠的体质量、足跖肿胀度、关节炎指数(AI);光镜下观察各组大鼠关节、心组织病理形态学病变;电镜下观察各组大鼠心组织病变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠TNF-α、IL-6、IL-10的表达;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心组织NF-κBp65、TNF-α的表达;免疫印迹法(Western blotting)法检测各组大鼠心组织NF-κBp65、TNF-α蛋白的表达。3结果3.1理论研究结果3.1.1类风湿关节炎与动脉粥样硬化1)RA脂质异常诱发As2)RA患者内皮功能障碍诱发As3)RA患者炎症增加动脉僵硬度4)RA患者胰岛素抵抗诱发As5)RA患者免疫异常增加As的患病风险3.1.2 RA动脉粥样硬化与心脏病变1)动脉粥样硬化加速血栓形成致心肌坏死2)动脉粥样硬化累及冠状动脉增加心血管事件3.1.3痹症与心痹1)心痹与脾虚密切相关2)心痹与情志密切相关3.2临床研究结果3.2.1 RA基础、炎症指标的变化RA患者CRP、ESR、RF、Ig G、CCP均显著升高。3.2.2 RA颈动脉内-中膜厚度的变化RA患者颈动脉内-中膜厚度较健康人群明显增高,RA患者中存在颈动脉硬化及颈动脉硬化伴斑块形成的比例较健康人群显著增高。3.2.3 RA踝肱指数的变化RA患者踝肱指数较健康人群显著降低。3.2.4 RA血管活性因子的变化RA患者体内血管活性物质PGI2较健康人群显著降低,TXA2较健康人群显著增高。3.2.5 RA血脂的变化RA患者普遍存在血脂异常,RA组TG、LDL-C显著升高,HDL-C显著降低,血脂异常率显著高于健康人群。3.2.6 RA研究指标与基础、炎症指标相关性分析相关性分析显示:RA患者IMT与年龄、病程、CRP呈正相关;RA患者ABI与年龄、病程呈负相关;RA患者PGI2与病程呈负相关,RA患者TXA2与病程呈正相关。3.2.7 RA研究指标与血脂相关性分析相关性分析显示:RA患者IMT与LDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关;RA患者ABI与HDL-C呈正相关。3.2.8 RA研究指标与关节症状积分值、DAS-28、中医证候积分值之间相关性分析RA患者IMT与关节晨僵积分呈正相关、少气懒言、倦怠乏力积分呈正相关;RA患者ABI与关节压痛积分、15m步行时间呈负相关;RA患者PGI2与少气懒言、倦怠乏力积分呈负相关,RA患者TXA2与双手握力积分呈正相关。3.2.9 RA研究指标与生活质量积分值相关性分析相关性分析显示,RA患者颈动脉内-中膜厚度与生理功能呈正相关,RA患者PGI2与生理功能呈负相关。3.2.10 RA研究指标与SAS、SDS相关性分析相关性分析显示,RA患者IMT、ABI均与SAS积分呈正相关。3.3实验研究结果3.3.1 AA大鼠体质量、足跖肿胀度、关节炎指数的变化及新风胶囊对其的影响致炎前,测量各组大鼠体质量、足跖肿胀度及关节炎指数(AI)无明显差异(P>0.05);致炎后19天,给药前,除正常组外,各组大鼠足跖肿胀度及AI较正常组均显著升高,体重较正常组明显下降(P<0.01);连续给药30d后,与模型组相比,三组给药组大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01),足趾肿胀度及AI均明显下降(P<0.05或P<0.01);三组给药组之间比较,XFC组大鼠体质量明显偏高(P<0.01或P<0.05),足趾肿胀度及AI无明显差异(P<0.05)。3.3.2 AA大鼠关节病理形态学变化及XFC对其影响光镜下观察AA大鼠的足趾关节HE染色病理切片:正常组大鼠的滑膜结构清晰,无增生、突起,少量炎细胞浸润;细胞分层较少,关节软骨结构完整;模型组大鼠关节滑膜大量炎性细胞浸润,滑膜血管翳增多,细胞分层增多,部分关节软骨表面毛糙;XFC组大鼠关节滑膜可见少量炎性细胞浸润,滑膜分层增多较少,关节面较规整;MTX组大鼠滑膜分层增多,关节面较模糊,TGT组大鼠可见少量炎细胞浸润,部分软骨破坏。3.3.3 AA大鼠心组织病理形态学变化及XFC对其影响光镜下观察AA大鼠心肌HE染色切片示:正常组(NC)大鼠心组织结构清晰,未见明显病理形态学改变;模型组(MC)大鼠心肌显示心肌纤维水肿、排列紊乱,细胞核形状不整,小部分心肌组织被纤维组织代替,细胞核固缩。XFC组大鼠心肌排列基本规整,心肌纤维水肿改善,偶见成纤维细胞增殖。MTX组心肌纤维排列欠规整,少部分心肌纤维水肿。TGT组心肌纤维排列欠规整,偶有心肌纤维水肿。3.3.4透射电镜显示AA大鼠心肌超微结构的比较正常组大鼠心肌细胞包膜完整,细胞核的结构完整,线粒体丰富,线粒体嵴紧密且排列有序结构清晰,肌原纤维呈纵向排列,Z线清晰,肌丝分布齐整均匀,肌节多呈平行分布,细胞间有少量胶原纤维。模型组大鼠肌原纤维排列无序紊乱,Z线模糊,肌节明显缩短,肌丝断裂、坏死、甚至溶解或消失,大量线粒体的排列无序紊乱,挤压肿胀,并可见线粒体空泡,线粒体嵴间隙明显扩张,嵴稀少并紊乱,细胞间的胶原纤维明显增生。XFC组大鼠心肌细胞的形态基本完整,肌丝排列较规则整齐紧密,Z线清晰,细胞间偶有少量胶原纤维。MTX组大鼠心肌细胞形态基本完整,部分肌节各带模糊,肌丝排列较规则,线粒体呈圆形或椭圆形排列于肌丝之间,部分线粒体肿胀或空泡化,细胞核较清晰,细胞间多有胶原纤维。TGT组大鼠心肌细胞的形态基本完整,Z线基本清晰,肌丝排列较紊乱,线粒体呈圆形或椭圆形排列于肌丝之间,部分线粒体肿胀且有空泡化,细胞核较清晰,细胞间多有胶原纤维。3.3.5 AA大鼠血清细胞因子的变化及新风胶囊对其的影响给药30d后,与正常组相比,模型组大鼠细胞因子IL-6显著升高(P<0.01);与模型组相比,三组给药组IL-6均显著下调(P<0.01);三组给药组之间比较无明显差异;与正常组相比,模型组大鼠细胞因子TNF-a显著升高(P<0.01);与模型组相比,三组给药组IL-6均显著下调(P<0.01);三组给药组之间比较无明显差异(P<0.05);与正常组相比,模型组大鼠细胞因子IL-10显著降低(P<0.01);与模型组相比,三组给药组IL-10均显著上调(P<0.01或P<0.05);三组给药组之间比较,其中XFC组在上调IL-10方面更有优势(P<0.01或P<0.05)。3.3.6 AA大鼠心组织NF-κB/TNF-α信号通路的变化及新风胶囊对其的影响(1)实时荧光定量法检测AA大鼠心组织NF-κBp65、TNF-α蛋白的表达及XFC对其的影响:给药30d后,与正常组相比,模型组NF-κBp65表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,其余三组给药组NF-κBp65表达明显降低(P<0.01或P<0.05);三组给药组之间比较,XFC组在降低NF-KBp65方面显著优于MTX组、TGT组(P<0.05)。给药30d后,与正常组相比,模型组TNF-α表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,其余三组给药组TNF-α表达明显降低(P<0.01);三组给药组之间比较,三组治疗组之间TNF-α表达无明显差异。(2)免疫印迹法检测AA大鼠心组织NF-κBp65、TNF-α蛋白的表达及XFC对其的影响:给药30d后,与正常组相比,模型组大鼠心组织NF-κBp65蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组相比,三组给药组大鼠NF-κBp65蛋白表达均显著降低(P<0.01);三组给药组间比较,XFC组在降低NF-KBp65蛋白方面显著优于MTX、TGT组(P<0.05)。给药30d后,与正常组相比,模型组大鼠心组织TNF-α蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组相比,三组给药组大鼠TNF-α蛋白表达均显著降低(P<0.01);三组给药组间比较,三组治疗组间TNF-α蛋白表达无明显差异。4结论4.1 RA患者易发动脉粥样硬化1)类风湿关节炎患者即使本身不存在传统心血管危险因素,依然较普通人群高发动脉粥样硬化。2)类风湿关节炎患者高发动脉粥样硬化可能与RA患者的炎症、血脂异常、血管活性因子紊乱相关。3)类风湿关节炎患者的脾虚可能加重动脉粥样硬化的发生发展。4)类风湿关节炎患者伴发动脉粥样硬化易降低患者生活质量,加重患者焦虑情绪。4.2新风胶囊对AA大鼠的疗效及对心脏病变的影响1)新风胶囊能显著提高AA大鼠体质量、改善AA大鼠足跖肿胀度、降低关节炎指数,并且对AA大鼠无不明显不良反应,在提高体质量方面优于其他用药组。2)新风胶囊能显著提高AA大鼠血清抑炎细胞因子IL-10,降低致炎细胞因子IL-6、TNF-α,平衡AA大鼠细胞因子网络,XFC组在上调IL-10方面由于其它用药组。3)新风胶囊可显著改善AA大鼠心肌细胞结构,抑制AA大鼠心肌纤维化。4)新风胶囊可抑制AA大鼠心组织NF-κB/TNF-α信号通路过度活化,下调AA大鼠心组织NF-κB65、TNF-α蛋白的表达。4.3新风胶囊改善AA大鼠的心脏病变的作用机制1)调节细胞网络因子,减轻心组织免疫炎症损伤新风胶囊能显著提高AA大鼠血清抑炎细胞因子IL-10,降低致炎细胞因子IL-6、TNF-α,增强抗炎能力,抑制血管内皮功能受炎症因子损害,从而改善AA大鼠心血管病变,减轻心组织免疫炎症损伤。2)调节NF-κB/TNF-α信号通路蛋白,抑制NF-κB/TNF-α信号通路过度活化新风胶囊能下调AA大鼠心组织NF-κB65、TNF-α蛋白的表达,抑制心组织NF-κB信号通路过度活化,改善AA大鼠心脏病变。