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目的:基本螺旋-环-螺旋家族成员e40位于3p26.1中,起转录抑制作用,通过负调控时钟基因和钟控基因的活性来参与昼夜节律的调节。最近的研究证明BHLHE40可能参与调节肿瘤细胞的进展。然而,BHLHE40调节肿瘤细胞侵袭和转移的机制,目前尚不清楚。近年来我国乳腺癌的发病率越来越高,因而进一步探究DEC1调节乳腺癌肿瘤细胞侵袭和转移的机制具有很大的意义,可能为治疗乳腺癌提供新的靶点。研究方法:本研究选取了乳腺癌细胞系MCF-7为研究对象,在体外转染和干扰BHLHE40,通过western、实时PCR检测EMT相关分子表达水平以及通过基质胶侵袭实验探究了BHLHE40对肿瘤细胞侵袭迁移的作用,然后又进一步通过免疫荧光、共沉、荧光素酶报告基因和CHIP实验探究了BHLHE40抑制CLDN1转录的分子机制。结果:1、我们的体外测定显示MCF-7细胞中BHLHE40促进肿瘤细胞侵袭迁移,而通过siRNA敲除BHLHE40抑制肿瘤细胞侵袭迁移。转染BHLHE40后抑制了CLDN1、CLDN4和CDH1的蛋白和mRNA水平,同时促进了SNAI1,SNAI2和VIM的蛋白和mRNA水平。干扰BHLHE40后,检测这些基因的表达得到了相一致的结果。2、研究证实BHLHE40抑制CLDN1的转录不是通过与CLDN1启动子区的E-box盒直接结合,进一步研究表明BHLHE40通过与SP1之间的物理相互作用减弱了后者对CLDN1的转录激活作用,从而来抑制CLDN1的转录3、通过构建BHLHE40剪接突变体,我们发现了BHLH和Orange区域对于BHLHE40与SP1的结合都是必不可少的。结论:1、MCF-7细胞中,BHLHE40促进肿瘤细胞侵袭转移2、MCF-7细胞中,BHLHE40通过与SP1相互作用,而不是通过与E-box结合来抑制CLDN1的转录3、BHLHE40的BHLH和Orange区域对于BHLHE40与SP1的结合都是必不可少的。