论文部分内容阅读
背景:随着国民生活方式的改变、人口老龄化及城镇化进程的加速,中国心血管病患病率处于持续上升阶段,心力衰竭患病人群也逐年上升。已有研究证实,心力衰竭是由包括炎症反应在内的一系列复杂的病理生理机制导致的一组临床综合征,炎症反应的持续存在导致了心肌细胞的损伤。目前观察到凋亡和自噬均可出现在心衰心肌细胞中,但自噬对心脏是保护作用还是损害作用仍未有定论。临床上观察到曲美他嗪、瑞舒伐他汀能降低炎症因子水平并改善心衰患者心功能,但其在心衰中的应用证据不足,其对心肌细胞凋亡和自噬的影响的研究目前还较少。目的:研究心肌梗死后心衰大鼠炎症因子、心功能及心肌细胞凋亡和自噬的水平,以及给予LPS刺激后单独应用曲美他嗪或瑞舒伐他汀后对上述指标的影响;探讨心肌细胞自噬对心脏的作用及心梗后心衰大鼠中炎症因子对凋亡和自噬水平的影响。方法:本实验通过结扎成年雄性Wistar大鼠前降支并饲养四周来制备心梗后心力衰竭模型40只,另设(1)假手术组(sham组)10只(未结扎前降支,余步骤相同)。制备成功的心力衰竭大鼠模型40只,随机选取30只给予腹腔注射LPS(脂多糖)刺激一次,另外10只作为(2)模型组(model组)。给予LPS刺激的大鼠根据是否给予药物再随机分为(3)未给药组(model+LPS组)、(4)曲美他嗪组(QMTQ组)、(5)瑞舒伐他汀组(RSFTT组)。给药4周后,通过心脏超声及血流动力学评价心功能;通过ELISA法测定血清中NT-pro BNP、hs-Tn T、IL-6、hs-CRP、TNF-α的水平;左心室取材后进行HE染色、Masson染色、TUNEL及DAPI染色,以观察心肌病理学改变、心肌纤维化及凋亡情况;左心室梗死边缘区取材,通过Western-Blot检测自噬相关蛋白LC3B、P62的表达,通过RTQ-PCR检测自噬相关基因Beclin1、Atg5、Atg7、Atg14的m RNA表达水平。结果:1.各组大鼠实验结束后均存活;模型组大鼠体重下降(P<0.05),其余各组之间差异无统计学意义;反应心室重构的心脏指数及心衰严重程度的肺指数,模型组有升高的趋势,两用药组有下降的趋势,但差异无统计学意义。2.通过ELISA法测定血清中IL-6、hs-CRP、TNF-α、NT-pro BNP、hs-Tn T的水平:与假手术组相比,模型组炎症因子及NT-pro BNP、hs-Tn T水平明显升高(P<0.01);model+LPS组与模型组相比无变化;两用药组与model+LPS组相比,炎症因子及NT-pro BNP、hs-Tn T水平降低(P<0.05或P<0.01)。3.由心脏超声及血流动力学反应的心功能表明:与假手术组相比,模型组心功能明显下降,差异有统计学意义;model+LPS组与模型组相比无变化;两用药组与model+LPS组相比,心功能明显改善,差异有统计学意义。4.HE染色及Masson染色:模型组心肌细胞排列紊乱、心肌细胞肿胀、心肌间及血管旁可见大量胶原蛋白沉积;model+LPS组与模型组相比无变化;两用药组与model+LPS组相比,心肌细胞紊乱及细胞肿胀改善,细胞内及血管旁胶原蛋白沉积减少。5.TUNEL及DAPI染色结果表明:模型组大鼠凋亡水平有上调趋势;model+LPS组与模型组相比凋亡水平无变化;两用药组与model+LPS组相比凋亡水平有下降趋势。6.Western-Blot和RTQ-PCR结果表明:与假手术组相比,模型组大鼠自噬体合成减少,自噬体分解减少,自噬水平下降(P<0.05);model+LPS组与模型组相比自噬水平无变化;两用药组与model+LPS组相比,自噬体合成增加,自噬流通畅,自噬水平上调(P<0.05)。结论:1.心梗后心衰大鼠由于炎症反应所致的心肌损伤使得心力衰竭加重,其机制可能与炎症反应介导的心肌细胞凋亡增加和自噬减少有关。2.曲美他嗪、瑞舒伐他汀通过抑制炎症反应,间接调控了心肌细胞凋亡和自噬水平,使得凋亡减少、自噬增加,在保护心肌细胞的基础上起到延缓心肌梗死后心力衰竭进展的作用。3.推测心肌细胞自噬对心脏有保护作用。