论文部分内容阅读
目的：通过造模成功的急性肝衰竭(acute liver failure, ALF)大鼠尾静脉注射人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)和生理盐水的对比研究,明确两组急性肝衰竭大鼠肝功能、病理学、卵圆细胞(oval cell)的活化与增殖以及Wnt/β-Catenin信号通路的表达差异。揭示人脐带间充质干细胞移植可启动急性肝衰竭大鼠肝细胞再生的发生及可能机制,为hUCMSCs临床治疗应用提供理论依据。方法：1、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-galactosamine, Gal-N) 0.9 g/kg诱导大鼠急性肝功能衰竭。造模后24小时经尾静脉移植2×106 hUCMSCs作为移植hUCMSCs组,同时将另一组造模后24小时的大鼠尾静脉注射同等容量的0.9%氯化钠溶液作为对照组。分别检测两组ALT和AST水平,比较两组肝脏组织病理学改变及死亡率。2、利用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)技术检测移植hUCMSCs组、移植对照组移植1、3、5、10天后卵圆细胞标记EpCAM、CK19,观察各时间点卵圆细胞活化与增殖情况,比较两组卵圆细胞增殖数量差异。3、利用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术检测移植hUCMSCs组、移植对照组肝组织中Wnt/p-catenin信号通路相关基因Wnt2、Wnt7a、Wnt7b和EpCAM的相对表达量。利用IHC、免疫荧光(immunofluorescence, IF)技术检测两组P-catenin的表达情况。结果：1、肝功能生化结果显示移植hUCMSCs组比移植对照组在移植后24、48h时ALT和AST显著降低(P<0.05)。苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)结果显示移植hUCMSCs组比移植对照组肝损伤轻,肝脏再生修复明显,病理分级差异有统计学意义(T=32.5,P<0.01)。生存分析显示移植hUCMSCs组的死亡率比移植对照组显著降低。2、IHC检测显示移植hUCMSCs组的卵圆细胞活化与增殖在移植后第5天达到高峰,并向肝实质延伸,且与移植对照组相比明显增多,差异有统计学意义(t==9.1531.P<0.01)。3、qRT-PCR检测显示移植hUCMSCs组在移植后24小时肝组织中Wnt/pβ-catenin信号通路相关基因Wnt2、Wnt7a、Wnt7b和EpCAM的mRNA表达分别为移植对照组的2.4倍(t=3.950,P=0.0168),3.1倍(t=4.846,P=0.0084),3.0倍(t=2.888,P=0.0447),1.7倍(t=3.219,P=0.0323)。IHC和IF检测显示β-catenin主要在活化的卵圆细胞的胞浆和胞核中聚集,且移植hUCMSCs组较移植对照组增多。结论：hUCMSCs移植入急性肝衰竭大鼠可以显著改善肝功能,减轻肝脏病理损伤程度,促进肝脏再生,降低死亡率。其机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导卵圆细胞活化增殖,从而发挥促进肝脏再生的作用。