中药补肾助孕汤对人子宫内膜细胞体外培养的影响

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目的:   本课题旨在通过对人子宫内膜细胞的原代和传代培养,观察实验组(即加药组)与对照组子宫内膜细胞的的镜下形态,绘制生长曲线,和检测细胞因子白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)、表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)、降钙素(calcitionin,CT)的表达的差异,探讨中药补肾助孕汤对人子宫内膜细胞体外培养影响。   方法:   取新鲜人子宫内膜标本体外分离培养,传代培养并观察其生长状况和细胞形态,鉴别其所含细胞种类。将中药方剂补肾助孕汤用基础培养液按不同倍数稀释制成培养基,继续培养子宫内膜细胞,与未添加中药的等量对照组相比,通过镜下观察细胞形态和描绘生长曲线观察其成长状况及应用免疫组化方法比较子宫内膜细胞LIF、EGF、CT的表达差异。   结果:   子宫内膜细胞经过体外分离培养后传代培养成功,细胞经角蛋白和波形蛋白鉴定提示人子宫内膜细胞体外培养包括基质细胞和腺上皮细胞,中药补肾助孕汤经过过滤、筛选,加入培养基。子宫内膜细胞加入含最适浓度中药的培养基后,继续进行细胞培养,与对照组相比,实验组细胞镜下观察其生长状况良好,细胞形态饱满,生长曲线对数生长期陡峭,传代时细胞个数增加,即补肾助孕汤可以促进人子宫内膜细胞在体外增殖。免疫组化显示加中药组的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的LIF因子(192.9031±14.5342 vs183.1568±9.1891,P<0.001,t=5.35)表达较对照组增加,有统计学差异;加中药组子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的EGF因子(196.4798±2.9071 vs184.5064±3.7335,P<0.001,t=26.1)表达相对于对照组增强,有统计学差异;加中药组子宫内膜腺上皮细胞的CT因子(183.1856±8.4227vs176.4184±0.4480,P<0.005,t=7.45)的表达相对于对照组也增强,有统计学差异。   结论:   中药方剂补肾助孕汤可以促进子宫内膜细胞在体外增殖,增强LIF、EGF、CT等因子的表达。将补肾助孕汤加入人子宫内膜细胞培养基中,子宫内膜细胞生长良好,子宫内膜细胞内表达LIF、EGF、CT等因子较对照组明显增强,提示中药补肾助孕汤可以促进子宫内膜细胞分泌LIF、EGF、CT,提示:中药补肾助孕汤可以改善人子宫内膜容受性。
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