【摘 要】
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目的 采用悬浮培养技术,体外分离培养胚胎大鼠大脑皮质神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs）,并进行扩增传代,观察其自我增殖和多潜能分化特性。 方法 1.取材及接种:无菌
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目的 采用悬浮培养技术,体外分离培养胚胎大鼠大脑皮质神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs）,并进行扩增传代,观察其自我增殖和多潜能分化特性。 方法 1.取材及接种:无菌条件下取出胚胎14～16天SD大鼠的大脑皮质,用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA进行消化,以吸管吹散至单细胞状态,加入含有EGF和bFGF的NSCs标准培养液,以1×106/ml浓度接种于培养瓶中,置入37℃、饱和湿度、5%CO2条件下开放悬浮培养。培养6～7d后形成的细胞球,用细口吸管进行机械分离,将大细胞球分散成单细胞或小细胞团传代培养。每3天以同样方法传代一次。 2.NSCs增殖能力的检测:在原代和第三代培养的NSCs培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,培养24h,固定后行BrdU免疫细胞化学染色。 3.NSCs的分化培养:将原代和第三代NSCs接种于预先涂布鼠尾胶原的培养板中,加入含有脑源性神经营养因子（BDNF）的NSCs分化培养液,观察NSCs贴壁后的迁移、增殖和分化。 4.免疫细胞荧光染色法对NSCs及其多分化潜能的鉴定:分别用抗NSCs特异性骨架蛋白——巢蛋白（nestin）抗体及神经元（MAP2）、星形胶质细胞（GFAP）的特异性抗体,采用免疫荧光染色法鉴定原代及传代的神
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