漆酶（EC1.10.3.2）是一种铜蓝氧化酶,在自然界中以单体糖蛋白的形式存在。它能够催化氧化酚类物质和降解木质素等。漆酶分子的活性中心有四个铜离子,根据可见光光谱和电子顺磁共振光谱的特征将其划分为三类:I型铜离子（T1Cu）、II型铜离子（T2Cu）和III型铜离子（T3Cu）。另外,漆酶广泛应用于工业和生物技术方面,是一种极具工业应用价值的蛋白酶。来源于Thermus thermophiles SG0.5JP17-16的漆酶（lac TT）拥有耐高温、耐高浓度盐和宽泛的p H范围等特性。该研究主要探究了lac TT底物结合域中会影响其催化功能的氨基酸残基。具体研究内容及结果如下:本课题研究了T1Cu周围loop中的关键氨基酸在催化反应中的作用。采用定点突变的方法将loop中的酸性氨基酸和碱性氨基酸突变为非极性的甲硫氨酸来研究其功能。紫外可见光谱学及酶促反应动力学数据表明,甲硫氨酸取代H397会导致T1Cu位点的Cu²⁺装载量减少和酶的催化效率降低。397位的氨基酸残基作为T1Cu的配位氨基酸,对稳定T1Cu的结构起着重要作用。而D193在突变为甲硫氨酸之后,突变体蛋白D193M的比酶活较野生型提高了30%。D357、E390、K428和K430等氨基酸残基在突变为甲硫氨酸之后,突变体的催化效率与野生型相比均有提高。D193M、D357M、E390M、K428M和K430M均为本研究中发现的正突变体。与野生型漆酶lac TT相比,D193M、D357M、E390M、K428M和K430M对活性艳蓝的脱色效率分别提高了14%、22%、19%、13%和21%。这些正突变体在对蒽醌染料脱色方面要优于漆酶lac TT。研究发现,D357和K428两个氨基酸残基在突变为甲硫氨酸之后,突变体D357M和K428M的催化效率与野生型相比分别提高了92%和154%。通过定点突变将D357和K428两个氨基酸残基同时突变为甲硫氨酸得到双突变体D357M-K428M,其在608nm处的吸光值与lac TT相比降低了89%,说明这两个氨基酸残基突变为甲硫氨酸之后,对T1Cu的结构产生了扰动。变异体D357M-K428M对活性黑WNN、活性黑B、刚果红的脱色效率与lac TT相近,对活性艳蓝的脱色效率与lac TT相比降低了16%。综上所述D357和K428对维持漆酶lac TT的催化功能具有重要作用。