TLR4单克隆抗体诱导同种心脏移植免疫耐受的研究

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目的:在大鼠同种异体腹腔异位模型中,使用TLR4单克隆抗体(Toll like receptor 4 monoclonal antibodies,TLR4mab)预处理受体大鼠,研究TLR4mab对受体自身免疫调节以及其对同种异体移植免疫排斥反应的影响,探索其诱导受体大鼠产生免疫耐受的可能,进而揭示其机理。方法:将供体Wistar大鼠及受体SD大鼠随机分成两组, A组(空白组):仅行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植;B组(TLR4mab组):术前一天受体SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR4mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后以每两天100ug/kg腹腔注射维持。观测指标:移植心脏的存活时间、病理改变,移植后受体外周血TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1变化,以及供心NF-κB的变化。结果:(1)供心平均存活时间(MST):A组:5.6±0.89天,B组:25.2±3.40天。B组平均存活时间较A组明显延长(P<0.05)。(2)外周血TNF-α(pg/ml):A组在移植后一天、三天、五天分别为112.90±21.23、213.75±21.85、469.53±47.35, B组在移植后一天、三天、五天分别为27.73±6.82、37.04±5.97、96.08±13.59;B组TNF-α含量明显低于A组,P<0.05。(3)外周血IFN-γ(pg/ml):A组在移植后一天、三天、五天分别为147.01±13.80、340.58±13. 624、516.21±40.34,B组在移植后一天、三天、五天分别为62.78±10.14、97.85±17.52、144.40±28.91;B组IFN-γ含量明显低于A组,P<0.05(。4)外周血IL-2(pg/ml): A组术后一天、三天、五天分别为1.96±0.03、2.78±0.02、4.84±0.03, B组在移植后一天、三天、五天分别为1.12±0.03、1.55±0.04、1.84±0.04;B组IL-2含量明显低于A组,P<0.05。(5)外周血IL-10(pg/ml): A组术后一天、三天、五天分别为49.17±3.70、51.40±3.79、46.09±2.54, B组在移植后一天、三天、五天分别为26.01±1.40、27.53±2.02、26.42±1.15;B组IL-10含量明显低于A组,P<0.05。(6)外周血TGF-β1:A组术后TGF-β1含量较术前略有降低,术后一天、三天、五天变化无明显统计学差异,P>0.05,术后呈下降趋势。B组术前与术后之间无明显统计学差异,P>0.05;术前、术后一天略低于A组,无统计学意义,P>0.05(7)供心NF-κB的表达(western-blot),测得灰度值分别为:A组:172.50±9.55,B组:73.61±6.31。B组较A组表达弱,P< 0.05。结论:(1)应用TLR4mab可以通过影响TLR4-MD2-LPS路径,影响下调Th1、Th2路径相关因子如IL-2、IL-10、IFN-γ等因子,影响供心在受体内的存活时间。(2)应用TLR4mab可以影响下调NF-κB水平,影响TNF-α、TGF-β1等因子减轻急性排斥反应,延长供心在受体体内的存活时间。(3)在大鼠同种异体异位腹腔心脏移植模型中我们可以观察到,应用TLR4mab可以明显减轻急性血管性排斥反应(AVR)的发生,但不能完全克服其发生。
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