【摘 要】
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背景 肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP）是常见的社区获得性肺炎,随着患病率日益上升,尤其难治性肺炎支原体肺炎明显增加了儿童肺部损害和多系统损害甚至死亡的风险[7]。因此,对早期MPP的发生及其严重程度判断成为临床实践中广泛关注的问题。目的 通过检测S100A8、S100A9、TNF-α及IL-6在不同严重程度MPP中变化,探讨MPP发病的炎症机
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背景 肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP）是常见的社区获得性肺炎,随着患病率日益上升,尤其难治性肺炎支原体肺炎明显增加了儿童肺部损害和多系统损害甚至死亡的风险[7]。因此,对早期MPP的发生及其严重程度判断成为临床实践中广泛关注的问题。目的 通过检测S100A8、S100A9、TNF-α及IL-6在不同严重程度MPP中变化,探讨MPP发病的炎症机制,为早期MPP严重程度的判断提供新的思路。方法 随机将小鼠分为实验组（包括高浓度组和低浓度组）以及对照组,采用气管插管重复给菌方式构建具有不同严重程度的MPP小鼠模型,并分别于建模后的第1,3,5天采集血液、肺泡灌洗液及肺组织标本。利用酶联免疫吸附试验方法（Elisa）检测实验小鼠血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）标本内的S100A8、S100A9、TNF-α及IL-6含量。利用苏木素伊红（HE）染色法浸染小鼠肺组织,用以分析评估MPP的严重程度和免疫组织化学染色（IHC）对S100A8和S100A9在肺组织中的定位进行观察以及运用TUNEL显色法检测感染肺炎支原体（Mycoplasma pneumonia,MP）后的小鼠肺组织内细胞凋亡情况。结果 （1）肺感染MP后的小鼠精神萎靡,对外界刺激反应迟钝,缩聚在鼠笼角落,以高浓度组第3天表现最为明显。（2）观察肺脏大体标本,感染MP后的小鼠肺脏颜色变暗,出现明显淤血水肿,其中高浓度组小鼠容易出现两侧肺脏病变,以第3天最为明显。（3）血清中各项因子经Elisa检测结果显示,与对照组相比,S100A8,S100A9,TNF-α在感染后第1,3,5天均表达增加,尤其高浓度组增高明显,且各组均以第3天增高最为显著（高浓度组VS.对照组,S100A8:710.4±18.8 VS.517.6±23.3;S100A9:689.3±30.8 VS.271.1±66.4;TNF-α:175.7±5.3 VS.104.5±11.6,P＜0.001）。血清IL-6在感染后的第3和5天明显增加（P＜0.001）。（4）小鼠肺泡灌洗液中各项因子经Elisa检测结果显示,与对照组相比,各项指标的浓度在感染MP均发生增高且以高浓度组小鼠的增加明显。（5）小鼠的肺组织经HE染色显示细支气管,毛细血管周围及肺组织间隙出现急性炎症细胞浸润包括嗜中性粒细胞,淋巴细胞以及单核巨噬细胞细胞,肺泡内可偶见炎性细胞浸润。经过肺组织病理学分析,与对照组相比,高浓度组小鼠肺组织病变明显,其中第3天最为显著（高浓度组VS.对照组:18.7±3.1 VS.5.7±0.9,P＜0.001）,并且病理学评分显示高浓度组小鼠MPP的严重程度在各时间点均较低浓度组小鼠严重。（6）肺组织中S100A8和S100A9的免疫组化定性分析结果显示感染MP后小鼠肺组织内阳性蛋白即S100A8和S100A9（显示为棕色颗粒）主要分布于细胞质以及肺组织间隙。（7）肺组织TUNEL染色分析显示,与对照组相比,感染MP后的小鼠肺组织内细胞凋亡增加,凋亡细胞主要可见于细支气管内皮细胞,肺泡上皮细胞以及肺泡内浸润细胞,尤其以高浓度组小鼠肺组织内表现明显（高浓度组VS.对照组:第1天,20.9±2.8 VS.9.5±2.2;第3天,41.5±2.4 VS.10.5±0.1,第5天,39.3±2.6 VS.9.7±1.1,P＜0.001）。结论 1.本实验成功通过气管插管重复感染MP活菌的方式构建了急性肺炎支原体肺炎动物模型。2.发生MPP时,血清及BALF中S100A8,S100A9,TNF-α及IL-6浓度升高,并且升高程度与MPP严重程度有关。3.S100A8和S100A9可能参与MPP疾病发展过程的调节,具有成为临床诊断MPP发生发展和严重程度的生物标记物的潜在价值。
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