论文部分内容阅读
在肝炎病原学诊断过程中，有相当一部分病例无法用已经建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型，1997年12月Nishizawa采用代表性差异分析（representational difference analysis，RDA）技术从一例非甲～非戊型输血后肝炎患者血清中成功获得500碱基长的基因克隆（N22克隆），称为输血后传播病毒（transfusion transmitted virus，TTV）。TTV广泛存在于世界各地，不仅在非甲～非戊型肝炎患者中存在，而且在各种甲～戊型肝炎患者、血液透析患者、血友病患者、静脉毒瘾者及正常人群和职业献血员中存在。TTV的基因型存在高频率变异，其基因型、病因学机理、传播途径尚不完全清楚。 2000年9月Fiordalisi等在GenBank登录SEN Virus（SENV）基因全序列，同年Umemura等报道SEN Virus与输血后感染肝炎有关；随后Tanaka等发现其核苷酸和核苷酸编码的氨基酸序列与TTV家族具有同源性，证实SENV是TTV家族的新成员，其核苷酸序列存在高度变异。Bowden和Allain报道SEN Virus可能是潜在的非甲～非戊型肝炎的致病病毒，但是尚无有力的证据证明。国内尚无有关SEN Virus的报道。 为了了解SEN病毒感染的临床意义，探索TTV家族新成员SEN病毒基因变异的多样性，为免疫诊断、预防、治疗非甲～非戊型肝炎提供理论依据，我们对495份不同人群的血清标本（44例非甲～非戊型肝炎患者、150例甲～戊型肝炎患者、ZI例 ALT升高的婴幼儿、86例血透患者、35例静脉毒痫者、引例正常体检人群和 108例健康助血．员），－采用巢式PCR方法，以扩增TTV原型片段为对照，研究SENV在上述人群中的感染状况；对其中的阳性＊＊R片段进行纯化、汝接及转化，获取重组质粒，进行＊＊A序列分析。 实验结果菜明，TTV PCR出现人小为 196hp片段，与预计 PCR产物人小一致。SENV PCR出现预FJJ 360hp片段，同时也出现比 360hp长的片段。 在本文研究的不同人群中的检出如卜 TTV和 SENV的检山率分别为7．5％和门．9％；TTV在患病者（非甲～非戊江仰‘炎患者、甲～戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿、血透患者、静脉毒痫者、）和健康人群（助血．员。止常体检人群）中的检出率分别为 15．8％、10．l％，两者无显著性差异。而SENV的检出率分别为门刀％、0刀％，两者有显柠性差异；SENV利 TTV在健康人群中的检出率分别为0．0％和10．1％，两者有显著性差异；SENV和TTV在患病者中检出率分别为11．0％和15．8％，同时川性的检出率为3．8％，两者有显著性差异。SENV在ALT升高患者（非甲～非戊型肝炎患者、甲～戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿）和在川。T上常的患者（包括血．透患者、静脉毒痛者）中的检出率为14．0％、5．8％，两者有显著性差异；而TTV的检出率分别为 17．7＊、12．4％，两者无显柠性差异。将I！II性 PCR”TV片段、SEN VK片段、短片段被克隆至pGEM－T－Easy载体之中，分别命名为pGEM－TTV、PGEM－SENVL、PGEM－SENVS，选取经酶切鉴定的重组质粒，进行DNA序列分析。川 DNA Toolss．1和 DNAStar软件处理、分析数据。TTV DNA片段序列与 TTV1、A278原地（AB008394）卜较芬析的序列同源性为97．4％。三个PGEM－SENV长片段和两个短片段进行测序，与SENV的序列（AX025667）比较分析，同源性分别为 87．7％、76．1％、88．2％、72．7％＄11 78．8％。 以上研究表明：首次发现我国存在 SEN VirSS散发感染，并且有与 TTV合并感染存在。SENV可能是一种重要病原体，临床检测SENV可能更有 2意义。我国存在不同于 SEN Virus（AX025667）的变异株；同一患者存在两种SEN V变异株的复合感染；SENV变异株其氨基酸序列与TTV家族成员有一定程度的同源性。