背景：　　特应性皮炎（atopicdermatitis,AD）作为儿童最常见的三大过敏性疾病之一，是一种慢性、瘙痒性、复发性、炎症性皮肤病。AD发病机制复杂，与遗传易感基因、环境因素、免疫因素和皮肤屏障功能改变相关。长期以来，普遍观点认为Th1/Th2功能失衡是AD发病的基础，急性期表现为Th2细胞占优势，慢性期则Th1细胞占优势。然而Th1/Th2失衡理论并不能很好的解释AD发病，随着对机体抗微生物免疫机制的深入研究，新发现的Th细胞家族成员Th17细胞成为国内外研究的焦点。很多研究表明Th17细胞在自身免疫性炎症性疾病发生发展过程中起着关键的作用，2003年Toda等人首次报道AD患者急性皮损中高表达IL-17后，相继有研究报道发现AD患者皮损及外周血中Th17细胞及细胞因子IL-17水平明显高于正常人，提示Th17细胞在AD炎症发生中有着重要作用，但具体机制尚不清楚。FK506（他克莫司）作为一种T细胞抑制剂，已广泛用于AD治疗，可明显缓解AD症状，但其是否通过Th17细胞途径实现对AD的治疗尚不明确。SEB（金黄色葡萄球菌肠毒素B）作为金黄色葡萄球菌分泌的一种超抗原，诱发或加重AD的机制是否与Th细胞亚群改变有关也不清楚。　　目的：　　本研究通过检测急性期中~重度AD患儿外周血Th细胞亚群比例，FK506和SEB对Th17细胞特异性核转录因子RORγt的作用及对PBMC(外周血单个核淋巴细胞)分泌细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的影响。以探讨Th17细胞在AD发病中的作用，以及FK506和SEB对其影响。　　方法：　　1.符合Hanifin-Rajka诊断标准的急性期中~重度AD患儿86例（男50，女36），SCORAD评分33~80，平均56.12±11.85，年龄0.25~14.75岁，平均5.39±4.04岁。健康对照组儿童81例（男48女33），年龄2.92~14.08岁，平均5.65±2.02岁。　　2.本研究用PMA（佛波酯）+Ionomycin（离子霉素）或SEB对AD患儿或健康对照PBMC进行处理，采用流式细胞术检测Th细胞亚群比例；ELISA法检测FK506和SEB对PBMC分泌细胞因子IFN-γ,IL-4，IL-17水平的影响，同时实时荧光定量RT-PCR法检测FK506和SEB对Th17细胞特异性核转录因子RORγt改变的影响。　　结果：　　1.PBMC中各Th细胞亚群比例：1）PMA+Ionomycin刺激PBMC后，AD患儿组外周血Th17、Th2细胞比例较健康对照组显著升高，Th1细胞比例较健康对照组显著降低。AD患儿组与健康对照组比较，Th17细胞比例升高（1.30±0.62vs0.63±0.27，p<0.001），Th1细胞比例降低（9.16±4.21vs20.07±5.13，p<0.001），Th2细胞比例升高（9.16±4.21vs20.07±5.13，p<0.001），有统计学显著差异。2）SEB干预后，比较AD患儿组和健康对照组Th亚群表达，Th17细胞比例均很低（0.19±0.14vs0.24±0.20，p>0.05），无明显差异，Th1细胞比例AD组明显低于对照组（3.43±1.88vs10.08±3.96，p<0.001），Th2细胞比例AD组明显高于对照组（2.38±2.33vs0.57±0.33，p<0.001）。　　2.FK506和SEB对RORγtmRNA表达的影响：1）AD患儿组RORγtmRNA表达显著高于健康对照组（2.64±2.31vs0.83±0.44，p<0.01）。2）FK506对RORγtmRNA表达水平的影响：FK506干预后AD患儿组和健康对照组RORγtmRNA表达均降低。AD患儿FK506干预组低于未干预组（0.26±0.23vs2.64±2.31，p<0.001），健康对照FK506干预组低于未干预组（0.20±0.18vs0.83±0.44，p<0.001）。3）SEB对RORγtmRNA表达水平的影响：SEB干预后AD患儿组RORγtmRNA水平明显高于健康对照组（1.51±1.05vs0.39±0.28，p<0.001）。　　3.FK506和SEB对PBMC分泌细胞因子的影响：1）未经干预的AD患儿组IL-17和IL-4水平均明显高于对照组，IFN-γ水平明显低于健康对照组。AD患儿组与健康对照组比较，IL-17水平升高（638.01±152.85vs369.57±107.22，p<0.001），IFN-γ水平降低（653.53±133.80vs1123.66±218.36，p<0.001），IL-4水平升高（537.15±160.73vs294.30±59.01，p<0.001），差异有统计学意义。2)FK506对PBMC分泌细胞因子的影响：FK506干预后，AD患儿组和健康对照组IL-17、IFN-γ、IL-4水平均明显降低。①IL-17水平：AD患儿FK506干预组低于未干预组（160.87±65.63vs638.01±152.85，p<0.001），健康对照FK506干预组低于未干预组（147.66±67.69vs369.57±107.22，p<0.001）；②IFN-γ水平：AD患儿FK506干预组明显低于未干预组（305.87±86.16vs653.53±133.80，p<0.001），健康对照FK506干预组明显低于未干预组（380.67±128.54vs1123.66±218.36，p<0.001）;③IL-4水平：AD患儿FK506干预组明显低于未干预组（61.36±33.48vs537.15±160.73，p<0.001），健康对照FK506干预组明显低于未干预组（134.12±34.71vs294.30±59.01，p<0.001）。3）SEB对PBMC分泌细胞因子的影响：AD患儿组与健康对照组比较，IL-17和IL-4水平明显升高，IFN-γ水平明显降低。AD患儿组IL-17水平明显高于健康对照组（593.50±119.16lvs284.23±84.69，p<0.001）,IFN-γ水平明显低于健康对照组548.46±99.70vs943.98±254.07，p<0.001），IL-4水平明显高于健康对照组462.71±109.63vs274.51±48.67，p<0.001）。　　结论：　　1.急性期中~重度AD患儿外周血Th细胞亚群存在比例失衡，AD患儿组Th17、Th2细胞比例较健康对照组升高，Th1细胞比例较健康对照组降低；PBMC分泌的细胞因子IL-17和IL-4水平AD组明显高于对照组，IFN-γ明显低于对照组，反映AD患儿体内存在Th细胞亚群失衡，急性期表现为Th17细胞和Th2细胞优势表达。　　2.检测AD患儿和健康对照外周血Th17细胞特异性核转录因子RORγtmRNA表达，发现其在AD患儿外周血中表达明显高于健康对照组，提示急性期AD患儿存在Th17细胞高表达。在AD患儿组和健康对照组中，FK506对RORγtmRNA表达均有显著抑制作用，提示FK506降低Th17细胞分化可能是缓解AD急性炎症反应的机制之一。　　3.AD患儿PBMC经SEB处理后，Th细胞亚群失衡，表现为Th17、Th2细胞亚群优势表达。尽管流式细胞术检测时发现AD患儿和健康对照Th17细胞比例均很低，差异无统计学意义，但SEB处理PBMC后RORγtmRNA和细胞因子IL-17均明显升高，提示SEB能增加AD患儿外周血Th17细胞表达。SEB可以使AD患儿外周血Th17和Th2细胞明显增加，造成免疫失衡，从而加重AD患儿症状。