外源性糖皮质激素对电化学发光免疫分析法皮质醇检测的干扰

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背景与目的糖皮质激素既是一种机体合成和分泌的重要内分泌激素,又是一种应用广泛的临床药物。内源性糖皮质激素是一种类固醇激素,由肾上腺皮质合成及分泌。皮质醇又名氢化可的松,是人体最主要的糖皮质激素。皮质醇对机体的心血管、代谢及免疫系统等均有支持及调节作用,糖皮质激素参与免疫活化的反馈调节,可抑制过度炎症反应。因此在临床上常用来治疗由免疫系统过度活跃所造成的疾病。此外,也常用于应激状态的改善以及激素缺乏时的补充或替代治疗。下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴为机体皮质醇合成和分泌的调节系统。体内皮质醇水平检测对于下丘脑—垂体—肾上腺轴功能的评价有重要意义,因此,检测方法是否能真实地反映机体内源性皮质醇水平。临床上所用的糖皮质激素主要为人工合成糖皮质激素,即外源性糖皮质激素。各种人工合成的皮质激素的结构和功能与皮质醇极为相似,因此外源性糖皮质激素可能对电化学发光免疫分析法皮质醇检测造成干扰。目前,电化学发光免疫分析法作为较先进的检测方法己被广泛应用于皮质醇水平检测,但是,并没有文献介绍这种方法在皮质醇水平检测方面的抗干扰能力。本课题用可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼松龙、地塞米松和倍他米松等六种临床常用的外源性糖皮质激素作为内源性皮质醇的干扰物,检测干扰物影响下的血清皮质醇水平,对六种外源性糖皮质激素进行干扰筛查以鉴别何种外源糖皮质激素可作为干扰物对电化学发光免疫分析法皮质醇检测产生干扰,及干扰剂量相关性分析以研究干扰物的剂量与效应关系,为将来临床皮质醇检测数据的判断提供参考。方法1干扰物溶液配制以无水乙醇为溶剂,分别将可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼松龙、地塞米松及倍他米松等6种标准品配制成浓度为500mg/L的6种干扰物溶液。2干扰筛查取方法1中配制好的六种干扰物溶液各10μL,分别加入500μL的血清中,配制成六种终浓度为10mg/L(1000μg/dL)的干扰物的溶液,作为实验组;取同等体积(10gL)的无水乙醇,加入500μL血清中,作为对照组。用全自动电化学发光免疫分析仪进行皮质醇浓度检测,记录检测结果。3剂量相关性分析将未用的剩余血清均匀混合,形成混合血清。将方法1中配制的六种干扰物溶液用无水乙醇稀释成不同浓度等级,加入混合血清中,分别配制成浓度为0、0.05(5)、0.1(10)、0.2(20)、0.5(50)、1.0(100)、2.0(200)、5.0(500)mg/L(μg/dL)的六种含有干扰物的血清,重复检测皮质醇浓度,记录检测结果。4统计分析采用SPSS17.0软件进行方差分析、配对t检验、简单回归等方法分析,以α=0.05为检验水准。结果1干扰筛查经电化学发光免疫法进行皮质醇检测,可的松,泼尼松,泼尼松龙及甲泼尼松龙四个实验组皮质醇检测结果均高于检测上限即大于60gg/dL,明显高于对照组结果。地塞米松及倍他米松两实验组皮质醇检测值均高于对照组,且经配对T检验,差异有统计学意义(地塞米松组:P=0.001,倍他米松组:P=0.006)。2剂量相关性分析检测结果通过简单回归分析得出六种干扰物剂量与干扰程度关系:六种干扰物均可对皮质醇检测产生干扰效应,且随干扰物剂量增加,皮质醇检测值增加;而加入小剂量的干扰物(泼尼松:c≦20μg/dL,甲泼尼松龙:c≦10}μg/dL,地塞米松:c≦200μg/dL,倍他米松:c≦50μg/dL)可对皮质醇产生负性干扰,而使皮质醇检测值小于真实值。可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼松龙、地塞米松及倍他米松六种干扰物的剂量与皮质醇检测值的回归关系表达式分别为:y=21.416+0.098x. y=17.056+0.018x、y=19.731+0.425x、y=19.086+0.52x、 y=16.978+0.08x、y=17.104+0.551nx。结论可的松、泼尼松龙、泼尼松、甲泼尼松龙、地塞米松及倍他米松六种临床常用的外源性糖皮质激素均可对电化学发光免疫法皮质醇检测造成干扰,且不同外源性糖皮质激素的检测干扰程度不同。小剂量的干扰物可对皮质醇检测产生负性干扰效应,随干扰物剂量增加,负性干扰效应减低,正性干扰效应增加。
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