细菌磁小体在体外免疫检测和基因传递中的应用

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuyixinsiboy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
细菌磁小体(BMPs)是趋磁细菌细胞内合成的磁性纳米颗粒,其组成为Fe<,3>O<,4>的晶体以脂膜包被。磁小体具有优良载体的性质,分别在固定化酶、吸附核酸用于基因枪弹、连接抗体进行免疫检测和载药后进行靶向治疗肿瘤等方面,具有广阔的应用前景。 本室的前期研究已经解决了趋磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)的深层培养问题,细胞的培养水平高于目前报道的5倍以上。本论文对纯化磁小体的多种方法进行比较,证明了细胞压榨机对细胞的破碎效果优于超声波,一次(1000 psi)可破碎90%的细胞,而在后续的洗涤步骤中,只需采用超声波轻微击打,配合磁铁吸附回收,即可获得纯净的磁小体。纯化的磁小体分别经电镜、红外和能谱进行检测。电镜观察表明,纯化磁小体的晶型稳定,颗粒均匀,直径多在25~45nm,外膜完整;不同批次纯化的磁小体在PBS缓冲体系(pH 7.4)中的红外检测波峰分布一致,能谱检测结果显示纯化的磁小体含有C、O、Fe、P、N等元素,无其他杂质存在,配合生化方法检测,建立了纯净磁小体标准红外谱图,并建议将其作为批量生产的检测标准。 比较并摸索了多种磁小体的灭菌方法,实验结果证明,r-射线灭菌是一种简便有效的手段。经MTT实验证明,灭菌后的磁小体对小鼠纤维原细胞L-929无毒害,利用家兔法证明纯净磁小体不含内毒素,可以将磁小体作为载体应用到细胞和动物体内的实验中。 通过优化磁小体与乙肝表面抗原抗体的连接方法,使连接效率提高到527μg抗体/mg磁小体。选用辣根过氧化物酶系统结合化学发光,用双抗体夹心法检测乙肝表面抗原,检测限可达到0.1ng/ml,灵敏度比酶免方法提高了5倍。通过对临床109份血清样本的检测,结果与酶免的方法100%吻合,说明该方法可以应用到临床样本的检测中。 利用聚乙烯亚胺(PEI)将BMPs和DNA连接形成复合物,进行体外细胞转染及动物体内基因传递实验,结果证实BMPs-PEI体系不仅能有效地将DNA递送到细胞内和动物体内并正常表达,也可作为核酸疫苗的增强剂而极大地刺激体内的免疫反应。当PEI与DNA的N/P比为8时,BMPs-PEI能达到较佳的转染效果;当N/P为8时,BMPs与DNA的质量比在0.5:1时转染效率可以达到最高。当BMPs存在时,BMPs-PEUDNA复合物可以抵御DNase-I的“消化”作用。在磁场的作用下,BMP-PEI/DNA能加速到达细胞的表面促进质粒DNA进入细胞。BMPs-PEI之所以能起到提高转染效率的作用,可能的原因是该系统具备渗透溶酶体的能力,促使目的DNA顺利到达细胞核内。BMPs-PEI和BMPs-PEI/DNA复合物对细胞几乎没有毒性。这是因为BMPs的膜上本身带有负电荷,可以中和一部分PEI上的正电荷,从而减轻对细胞的伤害。在磁场的作用下BMPs-PEI系统能明显增强β-半乳糖苷酶在体内的表达水平。以口蹄疫病毒核酸疫苗为实验材料,检测了BMPs-PEI在体内引起细胞免疫和体液免疫的水平,在磁场的作用下,该系统能显著增强机体免疫应答水平。因此,BMPs-PEI可以作为一种新型的载体系统应用到基因传递中。
其他文献
随着我国经济的发展,机动车数量与日俱增,停车难的问题成为城市交通比较棘手的问题,所以建设智能化停车场管理系统是非常迫切的。车位检测技术是智能停车场管理系统的关键技术之
球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Bals.)Vuill]是重要的虫生真菌,是应用最为广泛的生物防治杀虫真菌之一,在我国已经成功应用于亚洲玉米螟[Ostrinia furnacalis(Guenée)]的防
随着通信技术以及集成电路的发展,对通信系统性能要求也越来越高,采用软件无线电技术,将宽带ADC和DAC尽可能靠近天线,即把ADC和DAC从基带移到中频甚至射频,把接收到的模拟信
高性能同轴电缆接入系统HINOC(High Performance Network Over Coax)是基于同轴电缆传输信道的高性能宽带接入系统,可以实现数据在有线电视信号的同轴电缆传输信道中高速无损
本文基于卫星移动通信系统的系统模型、信道模型和干扰模型,参考地面长期演进(LTE)标准,对兼容LTE标准的卫星移动通信系统中的上行和下行参考信号(RS)的基本图样、使用方案和
学位
随着互联网的普及和信息技术的发展,网络入侵也日益成为人们关注的安全问题。目前的入侵检测技术存在:检测误报率较高;无法有效检测未知攻击等问题。为了解决上述问题,本文在协议
黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是一种典型的三分体+ssRNA病毒,属于雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)。该病毒广泛分布于世界各地,能够侵染10
对品种的准确鉴定和遗传多样性及遗传相关性的了解不仅是杨树遗传研究和育种工作的基础,而且对杨属植物的品种管理和生产栽培也具有十分重要的意义,而与发达国家相比,目前我国杨
激发极化法简称激电法,是以地壳中不同岩、矿石激电效应的差异为基础,通过观测与研究人工建立的直流(时间域)或交流(频率域)激电场的分布规律来进行找矿和解决地质问题的一种勘探方