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目的:近年来幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)在胃癌和结肠癌中的检出率明显升高。正常结肠上皮细胞(Formal colonic epithelial cells,FHC)向癌细胞转化的可能性与上皮间充质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)有着紧密的联系。在以往的研究中,证实了NF-κB(Nuclear factor kappaB)信号通路的激活可诱导结肠上皮细胞发生EMT,但具体机制尚不清楚。因此,本实验研究的目的是阐明U937细胞NF-κB信号通路激活后诱导的炎症微环境对结肠上皮细胞EMT发生的作用及其机制,从而为HP感染引起的疾病提供新的诊治参考方向。方法:1.哥伦比亚固体培养基结合脱纤维羊血及混合抗生素培养幽门螺杆菌,采用细菌染色和生物化学试验(革兰染色试验、尿素酶试验、氧化酶试验、触媒试验)对HP进行鉴定。2.培养U937细胞,HP干预U937细胞(HP细菌:细胞=100:1)。实验分为四组:对照组(Mock组)、HP干预组(8 h)、HP干预组(16 h)、HP干预组(24 h)。对四组的细胞分别用Western-blot实验和CCK-8实验检测四组细胞NF-κBp65蛋白的表达及四组细胞的毒性变化。3.HP干预U937细胞成功后收集细胞和上清,采用ELISA实验和RT-PCR实验分别检测四组上清液及细胞中的MIF、IL-1β、NF-κBp65因子表达变化。4.常规培养FHC细胞,HP上清处理FHC细胞(体积比,HP炎症上清:细胞培养基=1:50)。实验分为四组:对照组(Mock组)、HP上清干预组(12 h)、HP上清干预(24 h)、HP干预处理(36 h)。采用线粒体膜电位JC-1试剂盒和Western-blot对FHC细胞的早期凋亡水平及相关凋亡蛋白(Bcl-2蛋白、Bax蛋白)表达变化进行检测。5.同第4步方法,实验分为四组。采用Western-blot实验和免疫荧光实验检测EMT相关蛋白(N-cadherin蛋白、E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白)的表达变化情况。6.NF-kB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB通路后,用RT-PCR、ELISA、Western-blot、CJ-1等实验方法,分别对NF-κBp65蛋白、炎症因子、早期凋亡水平、凋亡蛋白(Bcl-2蛋白、Bax蛋白)、EMT相关蛋白(N-cadherin蛋白、E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白)的表达变化进行检测。结果:1.HP培养后,革兰染色阴性呈现红色海鸥状或者棒状杆菌,尿素酶试验、氧化酶试验、触媒试验鉴定呈阳性。2.HP干预U937细胞后,干预组(16 h、24 h组)NF-κBp65蛋白的表达量较Mock组显著的升高,且随着时间点的延长而增强(P<0.05);干预组(8 h、16 h、24 h组)细胞的毒性较Mock组显著增强(P<0.05);干预组(8 h、16 h、24 h组)炎症因子MIF、IL-1β的分泌量较Mock组显著升高(P<0.05);在分子水平层面RT-PCR结果也同样表明干预24 h组MIF、IL-1β、NF-κBp65因子表达变化与Mock组相比存在显著的增加(P<0.05)。3.FHC经HP炎症上清处理后,处理组(12 h、24 h、36 h组)早期凋亡水平较Mock组显著降低(P<0.01);处理组(24 h、36 h组)抑凋亡蛋白Bcl-2的表达与Mock组相比明显增加(P<0.05)、促凋亡蛋白Bax蛋白表达在处理组(24 h、36 h组)中较Mock组显著减少(P<0.01);处理组(24 h、36 h组)E-cadherin蛋白较Mock组表达明显减少(P<0.01);处理组(12 h、24 h、36 h组)N-cadherin蛋白较Mock组表达明显增多(P<0.05),处理组(24 h、36 h组)Vimentin蛋白与Mock组相比表达显著增加(P<0.01);处理组(12 h、24 h、36 h组)Vimentin蛋白的免疫荧光数目与Mock组相比明显增加。4.PDTC抑制NF-κB通路后,干预组(PDTC预处理U937细胞)(100mM、200mM、500mM、1000mM组)NF-κBp65蛋白表达显著的降低(P<0.001);细胞活性干预组(50mM、100mM、500mM、1000mM组)与Mock组相比明显受到抑制(P<0.05)、5mM和200mM组较对照组没有差异;干预组24 h组MIF、IL-1β、NF-κB等炎症因子的分泌量和基因表达量较Mock组都有着显著的降低(P<0.05);提前加入200mM浓度PDTC抑制剂后Bcl-2、Bax、N-cadherin蛋白、E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白与对照Mock组相比没有发生明显变化,结果表明,抑制剂PDTC自身对FHC没有影响(P>0.05)。5.PDTC抑制后的HP上清液处理FHC后,处理组(12 h、24 h、36 h组)的早期凋亡水平较Mock组显著升高(P<0.05);处理组(12 h、24 h、36 h组)抑凋亡蛋白Bcl-2的表达与Mock组相比明显的降低(P<0.05)、促凋亡蛋白Bax蛋白表达处理组(12 h、24 h、36 h组)较Mock组显著升高(P<0.05);处理组(12 h、24 h、36 h组)N-cadherin蛋白、E-cadherin蛋白较Mock组无显著变化(P>0.05);处理组(12 h、24 h、36 h组)Vimentin蛋白与Mock组相比显著降低(P<0.05);HP炎症微环境上清处理C57小鼠,与Mock组相比处理组N-cadherin、Vimentin蛋白表达明显的增多(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著的减少(P<0.05);Bax蛋白表达明显的减少、Bcl-2蛋白表达显著的增加(P<0.05)。结论:HP诱导的炎症上清促进FHC发生EMT是依赖于U937细胞NF-κB信号通路实现的,上述结果为探究HP感染诱导的炎症上清促进EMT发生发展提供了新的理论依据。