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研究目的噪声是听力障碍的主要原因之一,它引起耳蜗内组织机械损伤,进而引起一系列组织学、病理及分子改变。流行病学调查发现,全世界大约有百分之十的人存在听力障碍,其中有一半人口是因为暴露于噪声引起的听力损失。耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞死亡是导致噪声性耳聋的主要原因,最近研究发现,噪声导致血迷路屏障通透性改变也是原因之一。血迷路屏障(Blood-labyrinthbarrier,BLB)位于耳蜗外侧壁,由血管内皮细胞(Endothelial cell,EC)、周细胞(Pericyte cell,PC)、血管周围巨噬细胞样黑色素细胞(Perivascular resident macrophage-like melanocyte,PVM/M)和基膜(Basement membrane,BM)构成,BLB的正常功能对于维持耳蜗内电位(Endocochlear potential,EP)、离子转运及液体平衡具有重要作用。其中PC是一类环绕在内皮细胞表面的可收缩细胞,对血管生成、血流调节、血管完整性和组织纤维增生具有重要作用。目前认为高强度的噪声可以使周细胞受到损伤,从内皮细胞正常附着部位发生迁移,从而导致血迷路屏障失去稳定性,通透性增加。有研究报道,血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)在此过程发挥重要作用。PDGF属于四条链的生长因子家族,是间充质细胞等许多重要细胞内过程的生长因子,其中PDGF-BB是最常见的PDGF因子,当与受体结合后,激活下游信号转导通路,调节周细胞存活、迁移、凋亡、增殖和分化,与恶性肿瘤、动脉粥样硬化和纤维化的发生密切相关。地塞米松是一种合成的糖皮质激素制剂,是临床治疗自身免疫性内耳疾病、突发性耳聋和梅尼埃病等听觉系统疾病的常用药物。许多研究证实糖皮质激素不仅在听觉系统发育以及调节成年人听力敏感性中起着重要作用,而且对噪声性损伤具有明显的保护性作用。然而,尽管地塞米松应用如此广泛,但其对听觉系统作用的分子机制尚未可知。本研究旨在研究地塞米松在噪声引起的内耳微循环障碍的作用及潜在机制。研究方法1.以6-8周成年C57BL/6小鼠为研究对象,分为四组:对照组、噪声组、地塞米松+噪声组、Imatinib+噪声组。2.运用免疫荧光染色法观察对照组、噪声组、Imatinib+噪声组各组小鼠血管纹中血管的分布,PC的形态以及与血管之间的关系,计算周细胞迁移率及血管密度。3.运用Western blot法检测对照组、噪声组、Imatinib+噪声组各组小鼠血管纹中PDGF-BB蛋白水平。4.运用qRT-PCR法检测对照组、噪声组、Imatinib+噪声组各组小鼠血管纹中PDGF-BB的RNA水平5.进行ABR检测对照组、噪声组、地塞米松+噪声组三组小鼠听力情况,以左侧单耳听力为标准。6.运用免疫荧光染色法观察对照组、噪声组、地塞米松+噪声组各组小鼠血管纹中血管的分布、PC的形态以及与血管之间的关系,计算周细胞迁移率及血管密度。7.运用Western blot法检测对照组、噪声组、地塞米松+噪声组各组小鼠血管纹中的PDGF-BB蛋白水平。8.运用qRT-PCR法检测对照组、噪声组、地塞米松+噪声组各组小鼠血管纹中PDGF-BB 的 RNA 水平。研究结果1.免疫荧光结果显示,对照组PC形态正常,细胞呈扁平状,轴突紧密附着在邻近血管上,血管密度正常;噪声组PC形态异常,周细胞迁移率明显增加,血管密度明显降低,表现为分离的PC,其轴突向远离血管的方向移动;表现为突起的PC,其细胞呈圆柱体或突出的三角体;使用抑制剂Imatinib后,PC细胞迁移数目减少,周细胞迁移率明显降低,血管密度明显升高。2.Western blot结果显示,与对照组相比,噪声组血管纹中PDGF-BB蛋白水平明显增加,使用抑制剂Imatinib后,PDGF-BB蛋白水平降低。3.QRT-PCR的结果显示,与对照组相比,噪声组血管纹中PDGF-BB的RNA水平明显增加,使用抑制剂Imatinib后,PDGF-BB的RNA水平降低。4.ABR结果显示,与对照组相比,噪声组小鼠听力阈值明显升高,而地塞米松+噪声组与噪声组相比,听力阈值下降约10-15dB。5.免疫荧光结果显示,与对照组相比,噪声组周细胞迁移明显,周细胞迁移率增加,血管密度下降,而地塞米松+噪声组周细胞迁移减少,血管密度升高。6.Western blot的结果显示,与对照组相比,噪声组血管纹中PDGF-BB蛋白水平明显增加,而地塞米松+噪声组PDGF-BB蛋白水平降低。7.QRT-PCR的结果显示,与对照组相比,噪声组血管纹中PDGF-BB的RNA水平明显增加,而地塞米松+噪声组PDGF-BB的RNA水平降低。研究结论噪声引起的听力损失与血迷路屏障通透性增加密切相关,而周细胞迁移在这个过程中发挥了重要作用。噪声导致血管纹中PDGF-BB表达增加,抑制PDGF-BB发现周细胞迁移减少,证明PDGF-BB/PDGFRβ信号通路与噪声引起的耳蜗血管纹周细胞迁移密切相关。地塞米松也可以通过抑制PDGF-BB减轻周细胞迁移,控制血管纹水肿,恢复血管纹中组织稳态,从而对听力具有一定的保护作用。激素对内耳的作用机制、疗效判定虽有多年的研究,但临床的认识尚缺乏。本次创新性的提出了地塞米松对于临床治疗的一种新机制,为今后内耳疾病的治疗和研究提供了一种新的思路。