B型烟粉虱是一种分布范围广、经济危害性较大的农业害虫。而噻虫嗪是目前防治烟粉虱效果较好的杀虫剂,作为第二代新烟碱类杀虫剂的典型代表,也是第一个硫代烟碱类杀虫剂,因其高效、低毒、安全的特点成为目前防治刺吸类害虫的首选药剂。为了明确烟粉虱对噻虫嗪的抗性机制,本研究利用RT-PCR技术克隆了B型烟粉虱抗性、敏感品系的P450基因CYP6CM1,并进行序列比对分析;利用荧光定量PCR技术对其抗性、敏感品系CYP6CM1基因的mRNA表达量进行了定量分析与比较;对RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术进行了初步研究,本研究的结果如下:(1)成功克隆出B型烟粉虱的P450基因cyp6cm1,其中敏感品系、抗性品系长均为1591bp,含有1563bp的完整的开放阅读框,编码521个氨基酸;抗性品系与敏感品系相比,CYP6CM1基因发生了3个碱基替换,导致2个氨基酸替换,碱基替换的位置分别位于编码区的1048,1357,1377位。氨基酸替换为E 350 G、P452T。抗性、敏感品系的cyp6cm1基因的核苷酸相似性为99.81%,氨基酸序列一致性为99.62%。(2)采用荧光定量PCR技术研究了CYP6CM1基因在抗性、敏感品系中的mRNA表达差异,结果表明CYP6CM1基因在抗性品系中的mRNA表达量比敏感品系高,分别为86.81、23.72,抗性品系的表达量为敏感品系的3.66倍,初步表明噻虫嗪抗性的形成可能与该基因的过量表达有一定的关系。(3)对RNA干扰体系的建立进行了初步研究。设计了两段CYP6CM1基因片段,一段是位于保守区1185bp-1408bp之间长为223bp的核苷酸序列;另一段是位于非保守区750bp-967bp之间长为218bp的核苷酸序列。通过RT-PCR技术获得了相应的cDNA,即合成dsRNA所需的模板,为进一步进行RNA干扰奠定了基础。