栝楼抗肿瘤蛋白的纯化及活性研究

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栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)为葫芦科栝楼属植物,在我国主要分布于山东、河南、山西、陕西、江苏、浙江、安徽、四川、云南等省市。主要以果实和根部入药,均是历史悠久的常用中药材。瓜蒌,中国药典载为栝楼的果实,主要用来治疗心、肺方面的疾病。天花粉则来源于栝楼的块根,主要用于中期引产,主要成分为天花粉蛋白。天花粉蛋白曾在20世纪70年代在我国被广泛使用,但由于其在临床上容易引起发热、休克甚至死亡等过敏性反应,目前临床上很少使用。国外一些学者研究发现天花粉蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤等活性,尤其对HIV具有很好的抑制效果,因此天花粉蛋白又逐渐引起了人们的关注,但其毒副作用同样限制了其临床使用。目前很多医药工作者开始转向于寻找新的具有较低毒副作用的核糖体失活蛋白。本研究从所收集到的不同种质资源的栝楼中成功的分离、纯化到一种核糖体失活蛋白—Trichosanthrip,并对其性质和抗肿瘤活性进行了研究,取得了如下结果:1.从14份不同居群栝楼的种子中,采用硫酸铵分级沉淀、阳离子交换色谱和葡聚糖凝胶过滤色谱成功的纯化到了Trichosanthrip,经测定其纯度高达96.6%,产率为1 mg/100g种仁。2.Trichosanthrip经胰酶降解后使用LC-MS/MS分析,发现Trichosanthrip为AAILTSS超级蛋白质家族的一种新蛋白质。此类蛋白质广泛存在于植物的种子中,是植物种子中的一种自我防卫物质,具有抗真菌、病毒、细菌等病原物及抗昆虫的活性。3.使用MALDI-TOF MS精确测定Trichosanthrip分子量为10964.717 D;Trichosanthrip具有很好的RNA N-糖苷酶活性和蛋白质生物合成抑制活性,对蛋白质生物合成的IC50为1.6 ng/ml。4.Trichosanthrip能体外抑制S180肿瘤细胞增殖,使S180 G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,导致其出现G0/G1期细胞阻滞现象,其对S180的IC50为19.91μg/mL。5.Trichosanthrip能明显的抑制接种S180昆明种小鼠体内肿瘤生长,在1.5mg/kg·d剂量下,抑瘤率可达91.36%;在最高剂量1.5 mg/kg·d下,Trichosanthrip对小鼠的体重、脾脏指数和胸腺指数几乎无影响,其体重和脏器指数与空白对照无明显变化;且Trichosanthrip对小鼠的急性毒性很小,LD50为103 mg/kg,且当剂量达到75 mg/kg时才表现出急性毒性,远远高于实体瘤抑制实验中的最大剂量。
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