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目的:(1)对蛹虫草进行性状鉴别以及发酵产物提取分离。以期得到结构新颖且活性较好的单体化合物,并对其进行结构鉴定,对某些潜力化合物推测它们的生源途径,以便通过人工培养或人工合成的方式定向获得大批量目标产物。这些目标产物可能是有某些特定功能的物质。(2)对多根乌头进行花粉粒鉴别以及多根乌头中生物碱进行含量测定,为地产乌头属植物药快速鉴别提供孢粉学资料,同时也为中药质量控制的发展研究提供新的思路。 方法:(1)选取优良蛹虫草菌种,并对其进行培养条件的优选,大批量发酵后,对其进行代谢产物的分离鉴别。(2)采用扫描电子显微镜对花粉粒进行观察摄像,以及瑞士CAMAG薄层色谱扫描仪进行扫描,使用硅胶G薄层板;展开剂:石油醚∶丙酮(1.5∶1),加氨水4滴;氯仿∶甲醇(11∶0.55),加氨水2滴;显色剂:改良碘化铋钾;检测波长:230nm;狭缝尺寸:2nm x2nm。 结果:(1)蛹虫草最佳培养条件为:在马铃薯葡萄糖培养基中静置于28℃光照恒温培养箱中长至第十三天,以此条件大批量发酵后,对其进行代谢产物分离,共分离鉴定了15个化合物。其中包括环肽2个,甾体6个,醚类1个,酯类2个,咯嗪类1个,苯丙吡喃1个,松脂素2个。(2)乌头属六种植物花粉形态的一般特征为:花粉粒椭圆形至细椭圆形,极面观三裂三角圆形至三角形,但川乌极面观呈三裂带帽三角圆形。六种植物的花粉粒可分为两种类型:一、花粉粒椭圆形,点状纹饰,三沟;二、花粉粒细椭圆形,点状纹饰,三沟。根据含量测定的数据可知,乌头碱对照品溶液在浓度0.03-0.3mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,R值:为0.9992;平均回收率(n=9)为104.77%。计算得多根乌头所含总生物碱达0.65%,其中乌头碱0.14%、次乌碱0.10%、3-乙酰乌头碱0.09%、新乌碱0.02%。 结论:(1)通过对蛹虫草菌种代谢产物的分离,对于一些活性较好且比较有价值的化合物,我们可以从分子生物方向对其进行研究,依据特有的结构特征,进一步推测其生物合成途径,从基因的方面,对其进行一系列的有效重组以及敲除,以便通过人工培养或人工合成的方式定向获得大批量目标产物,使这些有价值的化合物从质到量的放大,从根本上解决了分离单体化合物时所需样品量大、杂质多、过程繁琐等问题,同时也改善了医药研究中单体化合物紧缺的状况。(2)乌头属植物花粉粒极面观可作为地产乌头与川乌的鉴别依据,但地产乌头属植物之间花粉粒形态没有明显不同之处,所以不宜单独以花粉形态特征作为区分依据。但是,使用扫描薄层法进行样品含量测定,图像用以直接观测并传达色谱结果,速度快,灵敏度高,溶剂消耗量少,成本低,操作方便简单。