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目的: IgA肾病是最常见的肾小球疾病之一,其无创性诊断和病情评估指标的探索是目前研究的热点。本研究利用激光微切割与蛋白质组学技术,研究IgA肾病肾小球和尿液中同步变化的差异蛋白,以期从尿液中筛选出反映IgA肾病肾小球病变的无创性指标。 方法: 选取2015年7月至10月我科收治的4例初次诊治、经肾活检确诊的IgA肾病患者,病理检查确诊为IgA肾病Lee分级 III/IV级,所有患者均排除紫癜性肾炎、乙肝病毒相关性肾炎等系统性疾病,留取肾活检前中段晨尿及肾穿组织。正常健康对照者4例,留取晨尿样本;肾脏肿瘤切除患者4例,留取瘤旁正常肾组织。利用激光微切割技术,从每例肾活检组织和瘤旁组织的石蜡切片中分离提取200个肾小球。利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白质组学技术,将IgA肾病患者尿液和肾穿组织肾小球的蛋白质组分别与健康对照者尿液和瘤旁正常肾组织肾小球蛋白质组进行对比分析。采用Western印迹、酶联免疫吸附试验与免疫荧光实验,以10例正常对照者、10例微小病变肾病患者、10例膜性肾病患者及30例IgA肾病患者为研究对象,对蛋白质组学分析结果进行验证。 结果: IgA肾病患者和健康对照者尿液蛋白组学分析显示,在Uniprot_human数据库中鉴定到的总蛋白为714个,假阳性率(FDR)<1%,选择后差异蛋白为246个。基因本体(GO)富集分析结果显示生物过程类蛋白集中于刺激反应、生物过程正向调节和免疫反应等,分子功能类蛋白集中于分子功能、蛋白结合和金属离子结合等,细胞组分类蛋白集中于细胞成分、膜组分和细胞外域等。京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析蛋白作用通路主要集中于细胞因子及受体相互作用、泛素调节的蛋白降解、果糖及甘露糖代谢和蛋白的消化与吸收,参与这些通路中的差异蛋白数目分别为12、11、10、15。IgA肾病肾穿组织和瘤旁正常肾组织激光微切割肾小球蛋白质组学分析显示,在Uniprot_human数据库中鉴定到总蛋白为161个,选择后差异蛋白为20个。GO富集分析结果显示生物过程类蛋白集中于组织构建、细胞突起构造和表皮发育等,分子功能类蛋白集中于结构分子活性、细胞骨架的结构成分和转移金属离子结合等,细胞组分类蛋白集中于蛋白复合物、大分子复合物和细胞器成分等。KEGG分析蛋白作用通路主要集中于黏着斑、PI3K-Akt信号通路、Hippo信号通路和细胞外基质受体相互作用,参与这些通路中的差异蛋白数目分别为4、4、2、3。对比分析上述鉴定出的两类差异蛋白,发现5个于肾小球和尿液中同步变化的差异蛋白,分别是免疫球蛋白κ轻链C域、补体C9和3个细胞骨架蛋白。Western印迹、酶联免疫吸附试验与免疫荧光试验证明了其正确性。 结论: 本研究提示尿液中某些免疫学指标可能与IgA肾病肾小球病变有一定联系,在 IgA肾病的早期诊断、治疗及其严重性的判断方面,具有重要的意义。