藿香内生真菌的分离纯化及次级代谢产物生物活性研究

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藿香(Agastache rugosus)是唇形科多年生草本植物。作为传统中药,其药用功效主要为解暑,治疗寒热等疾病。本实验以藿香作为研究对象对其内生真菌分离纯化、次级代谢产物的抗氧化及抑菌活性、分子生物学鉴定以及次级代谢产物化学成分等方面进行研究,研究内容和结果如下:采用组织分离法,从药用植物藿香(Agastache rugosus)的茎中共分离得到8株内生真菌,根据形态学方法初步鉴定出7株,分别属于短梗霉属(Aureobasidium sp.)、交链孢菌属(Alternaria sp.)、葡柄霉属(Stemphylium sp.)、刺盘孢菌属(Colletotrichum sp.)和棒孢霉属(Corynespora sp.)。将分离得到的8株内生真菌发酵,过滤得到菌丝体与发酵液,对菌丝体加热回流提取得到乙醇提取部位;发酵液分别用乙酸乙酯和正丁醇对萃取,合并,旋蒸,得到发酵液乙酸乙酯和正丁醇萃取物。次级代谢产物的生物活性的测定应用三种抗氧化活性实验及用微量肉汤培养法做体外抑菌活性研究。抗氧化结果表明:多数乙酸乙酯部位具有抗氧化活性,通过DPPH·自由基清除实验结果表明HX-J7对DPPH·清除率是97.44%,与Vc活性相当;由总还原力测定实验结果可知Vc当量超过30μg/mg以上的有HX-J1、HX-J4、HX-J6、HX-J7的乙酸乙酯部位且HX-J7的Vc当量达到52μg/mg;由羟基自由基清除实验结果可知,HX-J2、HX-J6、HX-J7乙酸乙酯部位清除活性超过50%,其中HX-J7清除率为58.30%。有HX-J6、HX-J7的正丁醇部位,其中HX-J7清除率为72.88%。抑菌活性结果表明:HX-J7对6种供试菌株的MIC值分别为250、250、500、250、250和250μg/m L。本论文以藿香内生真菌HX-J7发酵液乙酸乙酯提取液作为研究对象,对其化学成分进行分离鉴定。使用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20和其他色谱学方法以及结合薄层色谱检识,分离得到2个化合物。利用NMR、MS等现代波谱学技术,结合其理化性质对其结构进行解析,鉴定出2个化合物,分别是:对羟基苯甲酸(1),麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(2)。由于时间关系其他部位在后续工作中完成。
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