基于影像-病理对照的裸鼠横纹肌肉瘤DWI、IVIM与其EGFR和HIF-1α相关性实验研究

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目的:以影像-病理对照为基础,研究裸鼠横纹肌肉瘤模型的DWI和IVIM序列的参数:ADC、D、D*和f值与其病理指标EGFR、HIF-1α表达的相关性。材料与方法:一、实验材料:(一)实验细胞株(人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD)。(二)实验试剂:细胞培养所需试剂。(二)实验动物:雌性Balb/c裸小鼠,20只。(三)实验器材:3.0T GE磁共振扫描仪、显微镜。二、实验方法(一)裸鼠横纹肌肉瘤模型的建立DMEM完全培养基中培养RD细胞,接种细胞悬液到小鼠右侧大腿肌肉内。(二)裸鼠横纹肌肉瘤模型的MR图像获取及图像的后处理将裸鼠横纹肌肉瘤模型置于GE 3.0T磁共振扫描仪上扫描,扫描序列包括:T1WI、T2WI、DWI、IVIM。利用GE ADW 4.7工作站的Functool软件获取ADC、D、D*、f的伪彩图,在ADC图上信号最低处选取ROI,并复制到D、D*、f图像中以获得相应值,勾画三个ROI,取均值。(三)裸鼠横纹肌肉瘤模型的影像-病理对照方法裸鼠麻醉后,在体表肿瘤最明显处做一条垂直于身体长轴的标记线,扫描时调整扫描定位线与之重合,扫描完成后,将肿瘤取出,沿体表标记线分别系三条手术线,并于小鼠头侧系一条手术线用于确定方向,肿瘤取出后置于福尔马林浸泡8小时,取出后沿标本的体表标记线进行病理取材。(四)肿瘤标本的HE染色与观察(五)肿瘤标本的免疫组化染色与观察三、观察指标:(一)小鼠横纹肌肉瘤的体表表现(二)小鼠横纹肌肉瘤模型MRI表现(三)小鼠横纹肌肉瘤模型的大体病理、镜下病理表现。四、统计学方法应用SPSS25.0软件对MRI和免疫组化参数进行分析。首先,测定17只裸鼠横纹肌肉瘤的ADC、D、D*、f值、EGFR和HIF-1α为正态分布。如果数据均为正态分布,则采用Pearson检验分析图像参数与免疫组化的相关性。否则,用Spearman检验分析相关性。结果:一、小鼠横纹肌肉瘤模型肉眼表现:共建立17例肌内裸鼠横纹肌肉瘤模型,成瘤周期为26-30天。肿瘤体积范围约751-2116mm~3。二、小鼠横纹肌肉瘤模型的MRI表现:(一)常规MRI表现:见肿瘤位于右大腿肌肉内,T1WI呈不均匀等或稍高信号,T2WI呈不均匀高信号。(二)DWI、IVIM表现:17例裸鼠横纹肌肉瘤模型肿瘤的DWI、IVIM均表现为高低混杂信号,DWI、IVIM的参数ADC、D、D*、f参数值范围分别为:0.84±0.18×10-3mm~2/s,0.55±0.07×10-3mm~2/s,5.29±0.78×10-3mm~2/s,0.08±0.03。三、小鼠横纹肌肉瘤模型的大体病理、镜下病理表现:(一)大体病理表现、横纹肌肉瘤大体病理形状多不规则或呈类圆形,质韧、色灰白,其内可见少量肌肉纤维束。(二)镜下病理:肿瘤细胞呈圆形,细胞核大而深染。肿瘤细胞分布稍不均匀,部分肌纤维插入肿瘤细胞内,局部可见微血管水肿和肿瘤坏死。(三)免疫组化结果:EGFR为胞质染色,镜下呈棕黄色、暗黄色和浅黄色,HIF-1α为核染色,镜下可见棕黄色、暗黄色和浅黄色。EGFR的平均值约为5.00±1.22分,HIF-1α的范围约为4.06±0.97分。四、裸鼠横纹肌肉瘤模型DWI、IVIM各参数值与EGFR、HIF-1α表达的相关性(一)DWI、IVIM各参数值与EGFR表达的相关性经过统计分析,发现D值与EGFR有相关性,且呈负相关(r=-0.510,P<0.05),而ADC、D*、f值与EGFR之间无相关性。(二)DWI、IVIM各参数值与HIF-1α表达的相关性ADC、D值与HIF-1α有相关性,且呈负相关,相关系数分别为-0.491和-0.702(P<0.05),f值与HIF-1α有相关性,且呈正相关(r=0.485,P<0.05),但D*值与HIF-1α的表达无相关性。结论:基于影像-病理对照的方法,通过对17例裸鼠横纹肌肉瘤模型的DWI、IVIM参数与其EGFR、HIF-1α进行相关性研究,得出如下结论:一、首次使用裸鼠横纹肌肉瘤模型DWI、IVIM参数值预测其病理学EGFR、HIF-1α的表达,发现裸鼠横纹肌肉瘤模型的IVIM-D值与其EGFR有相关性,且呈负相关。二、裸鼠横纹肌肉瘤模型的DWI-ADC值、IVIM-D*值、IVIM-f值与其EGFR无相关性。三、首次发现裸鼠横纹肌肉瘤模型的DWI-ADC值、IVIM-D值与其HIF-1α有相关性,且呈负相关;裸鼠横纹肌肉瘤模型的IVIM-f值与其HIF-1α有相关性,且呈正相关。四、裸鼠横纹肌肉瘤模型的IVIM-D*与其HIF-1α无相关性。
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