葡萄糖氧化酶(EC1.1.3.4)是一种能够催化β-D-葡萄糖被分子氧氧化成葡萄糖酸-δ-内酯，并生成过氧化氢的氧化还原酶。葡萄糖氧化酶应用广泛，如可用于葡萄糖传感器制造、去除食品中多余糖分、葡萄糖酸及其盐的生产和燃料电池的制造等领域。但是过高的生产成本严重限制了其应用。为了降低其生产成本，本研究从实验室保藏的黑曲霉中克隆葡萄糖氧化酶基因，并以巴斯德毕赤酵母进行表达。首先通过透明圈初筛和摇瓶发酵复筛的方法，从实验室保藏的黑曲霉菌株中优选获得一株对葡萄糖转化能力较强的黑曲霉菌株QYW3221，以此作为出发菌株进行葡萄糖氧化酶基因的克隆。为了在后续研究中能够准确测定葡萄糖氧化酶的活力，本研究对连续分光光度法和滴定法测定葡萄氧化酶活力进行了对比研究，发现对于连续分光光度法和滴定法，酶活力分别在0.044-0.351U/mL和1.125-5.321U/mL时线性关系较好；对于连续分光光度法，在此范围内可以用两点法代替标准方法进行测定；相同的样品采用滴定法测定的结果要高于连续分光光度法，两种方法测定数值的换算关系为：滴定法测定值=（连续分光光度法测定值+0.1454）×1.2868+0.3793。连续分光光度法对于大量样品的测定更具优势。通过比对已经发表的黑曲霉葡萄糖氧化酶基因序列，找出其保守区域并设计引物克隆到了一段长度为1852bp序列，含有一个1818bp的编码区。通过BLAST比对证明已经克隆到黑曲霉葡萄糖氧化酶基因。使用SignalP4.0预测信号肽序列，发现有一个16个氨基酸组成的信号肽。以巴斯德毕赤酵母为表达宿主进行表达，将不含信号肽的编码序列亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K上，得到载体pPIC9KGOD。以限制酶MssⅠ（PmeⅠ）线性化并浓缩后电转化巴斯德毕赤酵母菌株SMD1168，并通过营养缺陷互补初筛。从初筛得到的菌落出发筛选到了能够在1mg/mL G418YPD平板上生长的菌落。将PCR鉴定为阳性的菌株进行培养，甲醇诱导7d后酶活最高可达14.9U/mL。