【摘 要】
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为增强妇科肿瘤化疗中骨髓保护作用,结合间充质干细胞基因转染效率较高,并且转染后不影响其生物学特性的特点,我们用灌流法联合密度梯度离心法自胎盘组织中分离纯化出间充质干细胞,并研究构建了携带多药耐药基因MDR1的逆转录病毒载体,以绿色荧光蛋白作为指示标记,构建的逆转录病毒载体PMX-MDR1-GFP与其外膜蛋白基因共同转染293T细胞,获得有感染性,复制缺陷的病毒颗粒后,转染人胎盘源MSCs,通过绿色
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为增强妇科肿瘤化疗中骨髓保护作用,结合间充质干细胞基因转染效率较高,并且转染后不影响其生物学特性的特点,我们用灌流法联合密度梯度离心法自胎盘组织中分离纯化出间充质干细胞,并研究构建了携带多药耐药基因MDR1的逆转录病毒载体,以绿色荧光蛋白作为指示标记,构建的逆转录病毒载体PMX-MDR1-GFP与其外膜蛋白基因共同转染293T细胞,获得有感染性,复制缺陷的病毒颗粒后,转染人胎盘源MSCs,通过绿色荧光显微镜观测到报告基因GFP的表达,WESTERN BLOT检测外源MDR1表达的P-gp,均证实逆转录病毒载体PMX-MDR1- GFP成功转染MSCs并表达了外源MDR1基因,柔红霉素泵出试验证明转染组细胞P-gp具有生物学活性。结果提示,mdr1逆转录病毒载体可有效转染人胎盘源MSC,转染的外源基因不但可充分表达,也可发挥正常的生理功能,为mdr1基因疗法尽快应用于临床,打下了实验基础,并提供实验依据。
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