目的尽管肝癌的临床诊断和手术治疗取得了极大的进展,但是肝癌的死亡率仍位居前三。肝癌早期不易被发现,患者诊断时多数已发生肝内转移甚至是远端转移。因此开发新的肝细胞癌诊断和预后因子具有重要且迫切的意义。最近研究发现,Panx1(Pannexin1)与肿瘤发生发展及恶性转移密切相关,Panx1通道抑制剂可明显降低乳腺癌的转移效率,敲低Panx1基因可明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力,Panx1的表达与胆囊癌的增殖呈负相关。在以上肿瘤的发生发展中,Panx1可能作为一种癌基因发挥着抑癌或者促癌的作用,而Panx1基因在肝癌中的功能及分子机制尚未阐明。本研究旨在探究Panx1在肝癌中的表达情况、以及其对肝癌增殖的影响,探讨与肝癌生长相关的因素,寻找新的防治靶点,为肝癌的治疗及预后提供可能的帮助。方法1.在TCGA数据库中,查找Panx1基因在肝癌中的RNA表达水平。2.运用免疫组化方法检测63例肝癌标本(癌和癌旁)中Panx1蛋白的表达水平。3.在人肝癌细胞株Hep3B、huh7、97L,97H、LM3中,运用western blotting技术检测Panx1在其中的表达情况。在Panx1表达相对低的细胞株97L和LM3中,运用慢病毒技术,将panx1过表达基因分别导入97L和LM3细胞中,构建Panx1基因过表达稳转株。4.运用蛋白免疫印迹技术检测肝癌稳转细胞97L和LM3中,Panx1和抑癌蛋白PTEN的表达水平。5.用CCK-8技术检测稳转细胞株97L和LM3的增殖能力,检测Panx1基因过表达对肝癌细胞97L和LM3增殖能力的影响。6.在裸鼠皮下种植LM3稳转细胞株,检测Panx1基因过表达对小鼠皮下成瘤的影响。7.在Panx1基因敲出小鼠和野生型小鼠中,检测Panx1敲出对Hepa1-6小鼠肝癌细胞体内成瘤的影响。结果1.在TCGA数据库中,我们检测发现Panx1基因在肝癌中是低表达的,在癌旁组织中Panx1基因的表达水平较高。2.在63例肝癌和癌旁组织中,Panx1蛋白在肝癌中的表达水平明显低于癌旁组织。3.检测肝癌细胞系中,发现Panx1在97L和LM3中的细胞表达较低,Panx1基因过表达后,PTEN蛋白表达水平增高。4.在体外细胞增殖实验中,相对于对照组,过表达Panx1基因可明显抑制97L和LM3稳转细胞的增殖能力。5.在裸鼠皮下成瘤实验中,与对照组相比,Panx1基因过表达能明显抑制裸鼠皮下LM3细胞成瘤的能力,其皮下成瘤体积明显减小。6.与野生型组小鼠比,在Panx1基因敲除小鼠中,Panx1基因敲除能明显促进小鼠体内Hepa1-6细胞的增殖能力,其皮下成瘤体积明显大于野生型组。结论1.我们检测到Panx1在肝癌组织中的表达量明显低于肝癌旁正常组织,Panx1在肝正常细胞L02的表达量明显高于其他肝癌细胞,panx1的表达具有显著差异性。2.Panx1的过表达能够明显抑制体内外肝癌细胞增殖能力。其表达可能起到抑制肝癌生长的作用,其可能参与肝癌的发生发展和预后。