【摘 要】
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本研究首先将克隆到的猪生长激素（pGH）基因cDNA编码区片断定向插入pMD-T质粒，转化大肠杆菌JM109，用菌落PCR和质粒PCR方法筛选阳性克隆；以BamH Ⅰ和EcoRI酶切鉴定重组质粒。将得到质粒用BamH Ⅰ和EcoRI酶切，胶回收后定向插入pPIC3.5k质粒，重组质粒命名为pPIC3.5k-pGH。pPIC3.5k-pGH。质粒用SalⅠ酶切线性化处理后，经电击转化GS115酵母，
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本研究首先将克隆到的猪生长激素（pGH）基因cDNA编码区片断定向插入pMD-T质粒，转化大肠杆菌JM109，用菌落PCR和质粒PCR方法筛选阳性克隆；以BamH Ⅰ和EcoRI酶切鉴定重组质粒。将得到质粒用BamH Ⅰ和EcoRI酶切，胶回收后定向插入pPIC3.5k质粒，重组质粒命名为pPIC3.5k-pGH。pPIC3.5k-pGH。质粒用SalⅠ酶切线性化处理后，经电击转化GS115酵母，用MD和MM培养基，筛选重组子，破碎细胞，提取基因组，用PCR的方法进一步鉴定，并用G418抗生素进行拷贝数筛选，以甲醇诱导目标蛋白表达，产物经SDS-PAGE和Western-blot分析，得到高效表达pGH的重组酵母，命名为pPIC3.5k-pGH／GS115，SDS-PAGE和Western-blot分析证明诱导重组酵母表达了pGH蛋白，分子量接近25KDa，与预期的24.4KDa的猪生长激素基因编码蛋白质构成的融合蛋白大小一致。 pPIC3.5k-pGH／GS115酵母经甲醇诱导表达，分别在48，72，96，120小时取样分析，得出最佳的表达条件和时间。从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收正确表达的融合蛋白，对小白鼠用纯化pGH蛋白灌胃)（B组）；同时收集表达酵母菌体，采用灌胃（C组）和自由采食方式（D组），第7d，14d，21d，28d称重，试验C
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