黄芩素对A549肺腺癌细胞的抗增殖作用及机制的研究

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目的:肺癌是发病率和死亡率极高的恶性肿瘤,其中约85%为非小细胞肺癌,大多数癌患者在就诊时已处于疾病的晚期或肿瘤已经发生了远处转移。黄芩素为唇形科植物黄芩的有效成分之一,是黄酮类化合物中的一种,属于酚类抗氧化剂,具有抗氧化、抗病毒、抗过敏等作用,其抗肿瘤作用近几年来在国际上逐渐成为学者的研究热点。本研究通过免疫荧光技术检测Ezrin, Skp2蛋白在肺腺癌A549细胞中定位情况;探索黄芩素(Baicalein, BAI)对肺腺癌A549细胞增殖的影响,研究黄芩素对细胞A549的最适抑制浓度范围;观察黄芩素对A549细胞中Ezrin和Skp2蛋白表达的影响,探索黄芩素诱导A549细胞凋亡及抑制A549细胞迁移的能力。方法:体外培养A549肺腺癌细胞,采用免疫荧光技术检测Ezrin, Skp2在A549肺腺癌细胞中的定位情况;A549肺腺癌细胞经不同浓度黄芩素处理,运用四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl tetrazolium, MTT)法检测BAI处理24h,48h,72h后的细胞增殖率及不同浓度下BAI对A549细胞的最适抑制浓度,倒置显微镜下观察BAI处理后A549细胞形态学改变,Hoechst33342染色法观察黄芩素对A549肺腺癌细胞凋亡的诱导作用、细胞划痕愈合实验(Wound healing assay)观察细胞迁移能力的改变;采用蛋白印记法(Western-Blot)检测经不同浓度黄芩素处理后,对A549肺腺癌细胞中的Ezrin、Skp2蛋白表达的影响;应用SPSS17.0统计软件处理分析,实验结果以(x±s)表示,P<0.05具有统计学意义。结果:免疫荧光技术检测结果显示,Ezrin及Skp2蛋白在A549肺腺癌细胞的细胞浆及细胞膜中均有明显表达,且Ezrin和Skp2在细胞膜上的表达高于细胞浆。倒置显微镜观察显示,未经黄芩素处理的对照组细胞呈多边形或三角形,状态良好,而经黄芩素处理48h后A549肺腺癌细胞生长明显受到抑制,形态变圆,其抑制作用随BAI浓度升高而增强。MTT法结果显示,黄芩素对A549肺腺癌细胞增殖的影响与药物作用时间的延长以及药物作用浓度增高呈正相关,呈明显的时间依赖和剂量依赖,与对照组比较差异性显著(P<0.001)。Hoechst33342染色结果显示,与对照组比较,经黄芩素处理组A549肺腺癌细胞出现了明显的Hoechst33342亮蓝染色,且随药物浓度升高亮蓝色增强。细胞划痕愈合实验结果显示,与对照组比较,经黄芩素处理组A549细胞的迁移能力受到明显的抑制作用。Western-Blot结果显示,经黄芩素处理组A549细胞中的Ezrin和Skp2蛋白表达受到抑制,且随药物浓度增高,对Ezrin和Skp2蛋白抑制作用增强。Ezrin和Skp2蛋白的相应灰度值(Relative Gray Value, RGV)与对照组比较,差异具有显著性(P<0.005)。结论:黄芩素可有效的抑制A549肺腺癌细胞的增殖和迁移,其机制之一与下调肺癌细胞中Ezrin和Skp2蛋白的表达有关。
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