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本研究利用桥式PCR技术克隆了人CNTF(humanCNTFhCNTF)基因，并构建了缺失了C末端15个氨基酸的突变体hCNTF重组质粒，表达的重组蛋白命名为rhCNTF(recombinanthumanciliaryneurotrophicfactor)。通过表达载体的选择、工程菌的筛选、表达条件的优化等过程，以实现rhCNTF的高效表达。随后经包涵体复性及纯化，获得高纯度的蛋白。最后对获得的rhCNTF进行理化性质的研究，包括：分子量测定、纯度分析、免疫原性测定、紫外吸收分析、等电点分析、氨基酸组分分析、肽图分析、N端测序等。
结果表明，用温度诱导型载体表达rhCNTF的效果较好。筛选到的工程菌在30℃培养至菌密度为A550=0.8-1.4时，置于42-44℃下诱导4h，rhCNTF表达量最高，达菌体总蛋白量的50％以上，获得了高效表达。经1％TritonX-100和2M尿素漂洗包涵体、稀释法和透析法复性、一步Q-Sephrose层析纯化等步骤，得到纯度高达99％以上的rhCNTF。最终每升菌液可获得高纯度的rhCNTF蛋白约50mg。rhCNTF理化指标的鉴定结果显示：分子量为21112.32Da；纯度约达99％；rhCNTF具有类似天然CNTF的抗原性；最大吸收峰为279.9nm；等电点为3.99；氨基酸组成分析与理论值基本一致；肽图分析rhCNTF与理论rhCNTF匹配；N末端15个氨基酸与理论rhCNTFN端2-16位的氨基酸序列一致。
本研究建立了一种简单、廉价、高效的获得rhCNTF的方法。这将为rhCNTF的进一步功能研究及开发应用打下良好基础。