目的探讨乙酰肝素酶（HPSE）基因在胃癌细胞侵袭和转移中的作用。方法利用PCR筛选表达HPSE基因的两株胃癌细胞株MGC-80-3和SGC-7901。设计四条针对HPSE基因mRNA的小干扰RNA（siRNA）片段,分别标记为:siRNA-a（5′-GGAGAAGUUACGGUUGGAAUG-3′）、siRNA-b（5′-GCUCUGUAGAUGUGCUAUACA-3′）、siRNA-c（5′-GCUUUAUGUGGCUGGAUAAAU-3′）、siRNA-d（5′-GCAAGUGGAUAAAUACCUUCU-3′）;另外设计一条无义对照序列,标记为:siRNA-NC（5′-GUUCUCCGAACGUGUCACGU-3′）。根据上述五条siRNA序列,设计并合成相对应的五对互补的单链DNA用于构建表达上述五条片段的重组质粒载体。利用脂质体Lipofectamine2000瞬时转染胃癌细胞MGC-80-3和SGC-7901。在转染后48h,通过实时荧光定量PCR检测干扰组与阴性对照组HPSE mRNA的表达并计算HPSE mRNA表达的抑制率[抑制率=[1-（目的基因mRNA表达量/内参基因mRNA表达量）_干扰组/（目的基因mRNA表达量/内参基因mRNA表达量）_{阴性对照组}]×100%],筛选出抑制率最高的重组载体。然后用抑制率最高的重组载体及无义阴性对照重组载体再次转染胃癌细胞,设立干扰组和阴性对照组,并利用MTT法联合Transwell小室及Matrigel胶检测细胞侵袭及迁移能力方面的变化。以穿膜细胞与未穿膜细胞的OD值的比值（OD450_穿/OD450_未）反映细胞的侵袭与迁移能力。选用带绿色荧光蛋白（GFP）标记的表达载体pCDH1-MCS1-EF1-copGFP构建HPSE的过表达载体。用过表达载体质粒分别瞬时转染MGC-80-3及SGC-7901胃癌细胞株,设立两株细胞的HPSE过表达组（实验组）;同时用空载质粒分别转染两种细胞设为两种细胞的对照组。转染48h后,通过实时荧光定量PCR检测HPSE mRNA的表达量,MTT法联合Transwell小室及Matrigel胶检测细胞侵袭及迁移能力方面的变化。结果1.胃癌细胞株MGC-80-3及SGC-7901均有HPSE基因的明显表达。2.按照DNA量（μg）:脂质体量（μl）比值为2:5的比例转染胃癌细胞,转染效率约为80%。3.成功构建靶向HPSE基因的RNA干扰载体,分别标记为pGPU6/GFP/Neo/siRNA-a、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-b、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-d、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-NC。4.在胃癌MGC-80-3细胞中,pGPU6/GFP/Neo/siRNA-a、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-b、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-d、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-NC对应各组中HPSE基因与内参GAPDH基因mRNA表达量的比值（H/G）分别为0.035±0.003、0.023±0.000、0.019±0.002、0.032±0.004和0.043±0.003。各干扰组与阴性对照组（pGPU6/GFP/Neo/siRNA-NC）分别比较,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。各干扰组的抑制率分别为18.6%、46.5%、55.8%和25.6%,其中最有效的干扰载体是pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c。用最有效干扰载体pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c转染细胞后,侵袭实验显示,干扰组与阴性对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.22±0.01和0.29±0.01,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。迁移实验中,干扰组与阴性对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.61±0.45和0.88±0.01,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。5.在胃癌SGC-7901细胞中,pGPU6/GFP/Neo/siRNA-a、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-b、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-d、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-NC对应各组中HPSE基因与内参GAPDH基因mRNA表达量的比值（H/G）分别为0.023±0.001、0.043±0.003、0.002±0.001、0.026±0.000和0.027±0.002。各干扰组与阴性对照组（pGPU6/GFP/Neo/siRNA-NC）分别比较,除pGPU6/GFP/Neo/siRNA-b外差异均有统计学意义（P均＜0.05）。干扰组pGPU6/GFP/Neo/siRNA-a、c、d的抑制率分别为14.9%、92.6%和3.7%。最有效的干扰载体是pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c。用最有效干扰载体pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c转染细胞后,侵袭实验显示,干扰组与阴性对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.48±0.10和1.25±0.34,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。迁移实验中,干扰组与阴性对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.29±0.00和0.28±0.01,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。6.成功构建靶向HPSE基因的过表达载体pCDNA-HPSE-GFP。7.在MGC-80-3细胞,转染过表达载体组（实验组）与空载体组（对照组）中HPSE基因与内参β-actin基因mRNA表达量的比值（HPSE/β-actin）分别为:6.1300±0.2546和0.0003±0.0000,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。侵袭实验显示,实验组与对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.814±0.012和0.535±0.010,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。迁移实验中,干扰组与阴性对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.598±0.028和0.613±0.018,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。8.在SGC-7901细胞,转染过表达载体组（实验组）与空载体组（对照组）中HPSE基因与内参β-actin基因mRNA表达量的比值（HPSE/β-actin）分别为:5.9050±0.1061和0.0003±0.0000,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。侵袭实验显示,实验组与对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.604±0.025和0.414±0.223,两组比较差异差异有统计学意义（P＜0.05）。迁移实验中,干扰组与阴性对照组OD450_穿/OD450_未分别为0.514±0.045和0.524±0.034,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1.构建的靶向HPSE基因的干扰质粒载体pGPU6/GFP/Neo/siRNA-a、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-b、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c、pGPU6/GFP/Neo/siRNA-d在胃癌细胞MGC-80-3中能显著抑制HPSE mRNA的表达,而在胃癌细胞SGC-7901中,除pGPU6/GFP/Neo/siRNA-b外,各干扰载体均能显著抑制HPSEmRNA的表达。2.在设计构建的四个干扰载体中,依据干扰片段siRNA-c构建的载体pGPU6/GFP/Neo/siRNA-c转染胃癌细胞MGC-80-3和SGC-7901后对HPSEmRNA的抑制率最高,分别为55.8%和92.6%。3.成功构建靶向HPSE基因的过表达载体pCDNA-HPSE-GFP,转染胃癌细胞MGC-80-3和SGC-7901后HPSE mRNA表达量均显著增高。4.抑制HPSE mRNA表达后,胃癌细胞侵袭能力下降;增强HPSE mRNA表达后,胃癌细胞侵袭能力增强。HPSE基因表达抑制及表达增强对胃癌的迁移能力没有影响。5.通过HPSE抑制表达及过表达正反两反面的比较,证实HPSE是促进体外胃癌细胞侵袭的重要因素。