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背景及目的: 新生儿容易发生感染,目前全球新生儿感染的发病率约7/1000例活产婴儿。同时,新生儿感染的死亡率高,感染仍是造成新生儿死亡的三大原因之一,约32%的新生儿死亡与感染有关。但是,新生儿感染的临床表现具有不典型性、多样性、隐匿性的特点,目前尚缺乏新生儿快速、特异、有效的早期诊断指标,因此对新生儿感染易感性的预测指标的研究具有重要的意义。传统理论认为新生儿对感染的易感性,是由于新生儿尤其是早产儿机体发育不成熟,特异性与非特异性免疫功能低下,容易受到病毒、细菌、真菌等侵犯引起新生儿感染性疾病。然而,这种免疫功能低下的个体差异大,且有赖于激发环境。这种相互矛盾的观点呼唤一个更有特异性的解释来说明新生儿免疫力低下的原因。目前,有研究发现新生小鼠和人脐带血生理性CD71+红细胞增加有免疫抑制效应;成人细胞在输入新生小鼠体内,或者与新生儿脾细胞共培养后,其固有免疫保护因子的分泌减少。CD71即转铁蛋白受体,是一种胎儿红细胞膜抗原,存在于早期红细胞、单核细胞和激活的淋巴细胞上,但不存在于成熟的红细胞上。在原始有核红细胞,CD71表达很弱或者检测不到,而在终末有核红细胞上阳性检出率可达100%。在新生小鼠除去CD71+细胞,或者随着新生儿生后生长发育而减少的CD71+细胞数目,均与其免疫抑制效应的丢失和在围生期抵抗李斯特菌和大肠杆菌的能力的保存呈平行关系。根据国内外研究现状,本项目组对新生儿感染与CD71+红细胞的关系提出假设:新生儿感染的易感性与脐带血中CD71+红细胞的含量相关。为了论证该假设,本实验应用流式细胞技术检测孕妇分娩时脐带血中CD71+红细胞的含量,并跟踪随访分娩新生儿1个月,收集相关临床资料,分析脐带血中CD71+红细胞含量与新生儿感染发生的关系,从而明确脐带血中CD71+红细胞含量对新生儿感染的预测作用及其临床意义。 方法: 1)标本来源:2014年7月1日至2014年12月31日在汕头大学医学院第二附属医院分娩的孕妇的脐带血标本。 2)入组标准:分娩孕妇年龄大于18岁;孕妇分娩前无感染病史;孕妇分娩前未使用抗生素;无肿瘤、高血压、心脏病、糖尿病等严重基础疾病。 3)临床资料的收集:收集分娩孕妇及新生儿的相关临床资料,收集内容见附件表格。 4)病例随访:所有入组病例随访新生儿1个月,每1周电话随访1次,记录新生儿发生感染的情况及预后。 5)标本的前期处理:收集本院分娩的孕母脐带血6ml,分别留置在带有抗凝剂的真空管中;采用1700转/分钟离心15分钟,分离出血浆,保存于-70℃;分离血浆后,将用Ficoll-Hypaque梯度液加入剩余的血液中,3500转/分钟离心5分钟,分离出红细胞和白细胞,取红细胞液(每6ml脐带血中约能分离出2ml红细胞液),采用流式细胞技术检测CD71+红细胞含量。 6)项目研究人员的分工和研究过程中的盲法 7)采用SPSS17.0统计软件进行临床资料及实验结果的统计分析;CD71+红细胞含量、孕母及新生儿的临床资料和新生儿在1个月内发生感染的情况等资料采用非参数检验;采用Logistic回归模型对影响新生儿在1个月内发生感染的情况的因素进行多因素综合分析;设定P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1、根据纳入标准及排除标准有87例新生儿进入分析,其中发生感染18例(新生儿败血症9例,新生儿肺炎7例,结膜炎1例,脓疱疹1例),未发生感染69例。所有新生儿中男性48名,女性39名;早产儿42名,足月儿45名;住新生儿科28例,未住新生儿科59例;使用抗生素18例,未使用抗生素69例。 2、发生感染与未发生感染的新生儿的CD71+红细胞比率和CRP的差异有统计学意义;WBC差异无统计学(t=0.62,P=0.641)。 3、CD71+红细胞比率按小于5.0%,大于5.0%分为阴性与阳性,CRP按小于8mg/L,大于8mg/L分为阴性与阳性。在全部研究对象和发生感染的新生儿中,CD71+红细胞比率诊断感染的阳性率较CRP高,差异有统计学意义(P<0.05);CRP与CD71+红细胞比率诊断感染的特异度和灵敏度的差异有统计学意义(P<0.05),CD71+红细胞比率的特异度和灵敏度均高于CRP,而两者的阳性预测值和阴性预测值的差异均无统计学意义(P>0.05)。 5、CD71+红细胞比率阳性(大于5.0%)与抗生素使用存在关联性,关联性大小为r=0.82,P=0.000,有统计学意义。 6、性别、出生体重对CD71+红细胞比率无影响,无统计学意义(P>0.05);出生胎龄和胎膜早破对CD71+红细胞比率有影响,有统计学意义(P<0.05)。 7、logistic回归分析显示出生胎龄和母体胎膜早破对新生儿出生时脐带血中CD71+红细胞比率均有影响。回归方程的方差分析X2=64.931,P=0.000,差异有统计学意义,决定系数R2=0.343,复相关系数R=0.59,回归方程拟合度为43.7%。 结论: 1)新生儿出生时,脐带血中CD71+红细胞的含量与新生儿感染的发生率呈正相关,可作为新生儿感染的早期预测指标之一。 2)脐带血中CD71+红细胞的水平有助于指导抗生素的选择应用。 3)母体胎膜早破和出生胎龄脐带血中CD71+红细胞的影响因素。