奶牛胎衣不下是指以产后12 h内未将胎衣排出体外为主要特征的一种疾病,是导致奶牛繁殖效率低下的主要原因之一。车前子作为一种传统的中药,在临床的应用中发现车前子治疗奶牛胎衣不下有着很好的效果。本实验室通过实验研究确定了酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下的有效部位,但有效部位中治疗奶牛胎衣不下的活性组分尚不明确。因此,本试验的目的是确定酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下有效部位中化合物的分离体系,并验证化合物对治疗奶牛胎衣不下的效果。为确定并分析酒炙车前子中治疗奶牛胎衣不下有效物质的化学式结构提供试验基础。为研发具有高效、毒副作用小和廉价等优点的治疗奶牛胎衣不下的药物提供理论基础。试验一通过有机溶剂石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯对酒炙后的车前子进行萃取,通过使用硅胶柱层析技术和TLC技术进行筛选萃取液中化合物的分离体系。试验二通过使用试验一确定的分离体系对有效部位中的化合物进行分离,并统计化合物回收率。试验三通过使用试验二所分离出的化合物进行动物试验,随机将30头奶牛分成6组,每组5头。设置化合物Ⅰ组、化合物Ⅱ组、化合物Ⅲ组、化合物Ⅳ组、化合物Ⅴ组和化合物Ⅵ组,每组动物在灌服药物后的48 h观察胎衣排出情况,并记录胎衣排出时间。试验一的结果显示,将柱体高度分成15 cm、25 cm和35 cm,二氯甲烷部位的化合物回收率分别为:73.21%、64.71%、45.26%;乙酸乙酯部位的化合物回收率分别为:10.98%、62.49%、45.39%。按照极性由低到高,二氯甲烷部位分离化合物的洗脱剂体系如下:1)、石油醚:乙酸乙酯为1:2;2)、石油醚:乙酸乙酯为1:30;3)、二氯甲烷:甲醇为30:1;展开剂体系为石油醚:乙酸乙酯,比例为4:1,乙酸乙酯部位分离化合物的洗脱剂体系如下:1)、石油醚:乙酸乙酯为100:1;2)、石油醚:乙酸乙酯为30:1;3)、二氯甲烷:甲醇为30:1;展开剂体系为石油醚:乙酸乙酯,比例为10:1。通过TLC结果可发现:在柱体高度同为15 cm的情况下,二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位中的化合物无法被成功分离成三个部分。在柱体高度同为25 cm和35 cm的条件下,二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位中的化合物可被分离成三部分化合物。试验二的结果显示:二氯甲烷部位中分离出的三部分化合物质量分别为:化合物Ⅰ为0.234 g;化合物Ⅱ为0.571 g;化合物Ⅲ为3.024 g,总质量为3.829 g,化合物回收比例为55.93%;乙酸乙酯部位中分离出的三部分化合物质量分别为:化合物Ⅳ为0.218g;化合物Ⅴ为0.085 g;化合物Ⅵ为0.753 g;总质量为1.056 g,化合物回收比例为51.39%。试验三结果显示:二氯甲烷部位中所分离出的化合物Ⅰ、化合物Ⅱ和化合物Ⅲ的治愈率分别为:40%、20%和60%,15头患病奶牛共治愈6头,总治愈率为40%;乙酸乙酯部位中所分离出的化合物Ⅳ、化合物Ⅴ和化合物Ⅵ的治愈率分别为:20%、20%和40%,15头患病奶牛共治愈4头,总治愈率为26.67%。上述试验结果表明:选用内径6 cm、容积为500 mL的层析柱,硅胶填充的高度为25cm最佳。二氯甲烷部位中所分离出的化合物Ⅲ的疗效显著,治愈率达到60%。乙酸乙酯部位中所分离出的化合物Ⅵ的疗效果明显,其治愈率为40%,提示了酒炙车前子发挥治疗效果的主要活性组分是化合物Ⅲ和化合物Ⅵ。