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实验目的：探讨盐霉素对鼻咽癌CNE-2干细胞放疗敏感性的影响。实验方法：第一部分：CNE-2细胞无血清培养培养,并鉴定CNE-2细胞微球干细胞特性鼻咽癌CNE-2细胞无血清培养基培养,镜下观察其细胞形态；加入SSM培养基观察CNE-2-CSC分化能力：采用Transwell小室法、流式细胞术、克隆形成实验分别检测其侵袭能力、CD133表达率、细胞增殖能力。第二部分：盐霉素对鼻咽癌CNE-2干细胞放疗敏感性的影响鼻咽癌干细胞无血清培养,MTT检测盐霉素药物剂量反应及不同放射剂量CNE-2-CSC细胞增殖能力,MTS法检测细胞抑制率；克隆形成实验检测盐霉素对CNE-2-CSC细胞的放射增敏作用；采用RT-PCR、Western blot法检测人鼻咽癌干细胞中Rad51、Ku70、Ku80基因及蛋白表达水平。实验结果：第一部分：无血清培养的CNE-2-CSC细胞镜下呈球状悬浮生长,折光性强；CNE-2-SCS加入SSM培养基,细胞分化出与CNE-2细胞形态相似的细胞；与普通CNE-2细胞相比,CNE-2-CSC具有较强的侵袭能力,(142±7)／视野VS(63±8)／视野,P<0.01；高表达CD133,其阳性表达率分别为(98.29±1.28)%和(1.58±0.28)%,P<0.01：CNE-2-CSC细胞具有较强的自我增殖能力,克隆形成数明显高于CNE-2细胞。第二部分：MTT法检测出盐霉素IC50=3.026μM, SF2μM=62.4±3.3%,6MV-X射线LD50=8.226Gy, SF6Gy=75.7±1.89%.盐霉素联合射线处理组细胞抑制率比单用盐霉素组、单用X射线照射组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验显示盐霉素降低了受照射后CNE-2-CSC细胞的克隆形成率,根据拟合存活曲线计算出放射生物学参数提示盐霉素提高了放射敏感性,单击多靶模型计算反射增敏比为1.345。盐霉素联合射线组鼻咽癌干细胞Rad51、Ku70和Ku80 mRNA表达水平明显低于射线组,差异有统计学意义(P<0.05)。盐霉素联合射线组鼻咽癌干细胞Rad51、Ku70口Ku80蛋白表达水平显著低于单独射线组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论： CNE-2干细胞培养成功,并具有较强的侵袭能力、增殖能力和高表达CD133。盐霉素联合放疗能够明显抑制人鼻咽癌CNE-2干细胞增殖、并抑制细胞中Rad51、Ku70和Ku80的基因及蛋白表达,这表明盐霉素对针对鼻咽癌干细胞放疗具有协同作用,其机制可能是通过阻止DNA修复实现。