【摘 要】
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目的血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）位于血管中膜层,是动脉的主要细胞成分,也是冠状动脉疾病（Coronary Artery Disease,CAD）的关键决定因素。Micro RNAs（miRNAs）在血管系统中表达。Mi RNA-326在大多数肿瘤中下调,并抑制肿瘤增殖。然而,miRNA-326在VSMCs中的作用尚不清楚。本课题旨在探讨mi
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目的血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）位于血管中膜层,是动脉的主要细胞成分,也是冠状动脉疾病（Coronary Artery Disease,CAD）的关键决定因素。Micro RNAs（miRNAs）在血管系统中表达。Mi RNA-326在大多数肿瘤中下调,并抑制肿瘤增殖。然而,miRNA-326在VSMCs中的作用尚不清楚。本课题旨在探讨miRNA-326调控血管平滑肌细胞中的增殖、迁移和表型转换,有望为血管增生性疾病的预防和治疗提供潜在的靶点。方法（1）通过qRT-PCR检测正常和颈动脉球囊损伤模型大鼠中miR-326的表达。（2）VSMCs转染miR-326-inhibitor,24h后利用q RT-PCR检测miR-326的敲低效率。（3）在VSMCs中使用miR-326-inhibitor内源性敲低miR-326后,通过q RT-PCR检测α-SMA、MHC和CNN1等收缩蛋白在m RNA表达水平,观察VSMCs的表型转换在m RNA水平的变化;通过q RT-PCR检测增殖蛋白PCNA和Ki-67在m RNA上的表达水平。（4）VSMCs转染miR-326-inhibitor,24h后通过Western blot来观察miR-326-inhibitor如何影响α-SMA、MHC、CNN1等收缩蛋白,观察miR-326-inhibitor在翻译水平上如何调控VSMCs的表型转换,以及通过Western blot来观察Ki-67和PCNA等增殖蛋白的表达。（5）VSMCs转染miR-326-inhibitor,24h后通过划痕实验来分析miR-326-inhibitor对VSMCs迁移的影响。（6）VSMCs转染miR-326-inhibitor,24h后通过Transwell实验来分析miR-326-inhibitor对VSMCs迁移的影响。（7）Mi R-326-mimic转染VSMCs,通过q RT-PCR检测转染24h后miR-326的过表达效率。（8）在VSMCs中使用miR-326-mimic过表达miR-326后,通过q RT-PCR检测α-SMA、MHC和CNN1等收缩蛋白在m RNA的表达水平,观察miR-326-mimic调控VSMCs表型转换在m RNA水平变化;通过q RT-PCR检测增殖蛋白PCNA和Ki-67在m RNA上的表达水平。（9）VSMCs转染miR-326-mimic,24h后通过Western blot来检测miR-326-mimic如何调控α-SMA、MHC和CNN1等收缩蛋白,观察miR-326-mimic在翻译水平上如何调控VSMCs的表型转换,以及通过Western blot来观察Ki-67和PCNA等增殖蛋白的表达。（10）VSMCs转染miR-326-mimic,24h后通过划痕实验来观察miR-326-mimic对VSMCs迁移的影响。（11）VSMCs转染miR-326-mimic,24h后通过Transwell实验来观察miR-326-mimic对VSMCs迁移的影响。结果（1）相比正常组,miR-326在颈动脉球囊损伤组的表达下调。（2）在细胞层面上,相比对照组,抑制内源性miR-326的表达后促进了VSMCs的增殖和迁移能力,Ki-67和PCNA在蛋白和m RNA上的水平升高;CNN1和α-SMA在蛋白和m RNA上的水平下降,表明miR-326-inhibitor也促进了VSMCs的表型转换。MHC只有m RNA水平下调,而蛋白水平无明显差异。（3）相比对照组,过表达miR-326后抑制了VSMCs增殖和迁移,Ki-67和PCNA在蛋白和m RNA上的水平下降,升高了α-SMA和CNN1在m RNA和蛋白水平上的表达,抑制VSMCs的表型转换。此外,MHC只有m RNA水平上调,而蛋白水平无明显差异。结论相比正常组,miR-326在颈动脉球囊损伤组表达下降;miR-326-inhibitor能够下调VSMCs收缩蛋白表达,促进表型转换,促进VSMCs增殖和迁移;miR-326-mimic能够上调收缩蛋白表达,抑制表型转换,也抑制增殖和迁移。
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