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目的心肌缺血是引发心血管疾病的主要原因。针灸疗法具有无毒副作用、操作方便及价格低廉等优势,对心脏生理活动有良好的调整作用,可以有效地预防、治疗心肌缺血。本实验采用“标本配穴”电针方法对大鼠进行干预,以心肌能量改变为切入点,观察心肌细胞三步有氧呼吸的相关酶GADPH、CS、CCO活性,线粒体的结构与功能,心肌微观组织结构,大鼠心电图S-T段及形态与行为学变化,从局部至整体分析“标本配穴”腧穴配伍方法对大鼠心肌缺血的保护效应,探讨“标本配穴”电针干预对慢性心肌缺血的预防及治疗效果。方法本实验选用3月龄Wistar雄性大鼠45只,体重180~220g,编号后按随机数字表分入空白组、模型组、标本配穴电针干预组,每组15只。三组大鼠适应性喂养3日后,于第4日起正常组大鼠连续7天在颈背部皮肤丰厚处按照5mg/kg行皮下注射0.9%无菌生理盐水;模型组大鼠连续7天在颈背部皮肤丰厚处按照5mg/kg行皮下注射盐酸异丙肾上腺素建造慢性心肌缺血模型;干预组大鼠连续7天给予足三里、关元、内关电针干预,同侧足三里与内关组成一对接通电极,关元旁5mm处另直刺一针,与关元组成一组接通电极,采用韩式-200型号电针治疗仪,选用疏密波,2~100Hz,1m A,每天干预10分钟。电针干预后在颈背部皮肤丰厚处按照5mg/kg行皮下注射盐酸异丙肾上腺素建造慢性心肌缺血模型,造模后继续给予电针干预14天。分别于第3天、第10天、第17天、第24天记录三组大鼠心电图S-T段振幅与一般情况,于第25天取材,观察心肌组织结构及线粒体超微结构,检测线粒体呼吸控制率、心肌组织3-磷酸甘油醛脱氢酶、柠檬酸合成酶、细胞色素C氧化酶活性及组织内ATP含量。结果1.大鼠一般情况观察比较:在实验过程中,模型组大鼠眼角附着分泌物,口唇紫绀或淡,鼠尾色淡,鼠毛稀黄,精神萎靡,反应能力减弱、饮食量减少;干预组大鼠仅表现为眼迷、易惊,其余如常。2.心电图S-T段振幅比较:模型组与干预组大鼠在造模后心电图S-T段明显升高,与正常组相比较存在显著性差异(P<0.01);电针干预后,干预组大鼠S-T段趋于正常,与模型组相比较存在显著性差异(P<0.01)。3.大鼠心肌组织病理结构的比较:光学显微镜下模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,部分纤维结构破坏,细胞核固缩,心肌间质水肿、出血,炎症细胞浸润间隙增大。干预组大鼠组织结构大致正常,少量心肌纤水肿、结构模糊,心肌间质存在少量红细胞,轻度水肿。透射电镜下模型组大鼠心肌细胞肌原纤维断裂、结构模糊,排列紊乱,闰盘融合、形变,心肌细胞肿胀、空化、破坏,细胞核破坏,线粒体排列紊乱,部分线粒体固缩、肿胀、空泡样病变,线粒体嵴断裂成絮状或缺失。干预组大鼠部分肌丝溶解、断裂,心肌细胞轻微肿胀,轻度空化,线粒体排列稍紊乱,部分线粒体水肿、存在空泡样病变。4.大鼠心肌组织ATP含量的比较:模型组的大鼠心肌组织ATP含量明显低于空白组,存在显著性差异(P<0.01);干预组的大鼠心肌组织ATP含量明显高于模型组,存在显著性差异(P<0.01),但干预组心肌组织ATP含量低于空白组,差异显著(P<0.01)。5.大鼠心肌线粒体RCR的比较:模型组的大鼠线粒体RCR明显降低处于异常水平,与空白组线粒体RCR存在显著性差异(P<0.01);干预组的大鼠线粒体RCR处于正常水平,明显高于模型组,存在显著性差异(P<0.01),但干预组线粒体RCR低于空白组,差异显著(P<0.01)。6.大鼠心肌组织GAPDH活性比较:模型组的大鼠心肌组织GAPDH活性明显低于空白组,存在显著性差异(P<0.01);干预组的大鼠心肌组织GAPDH活性明显高于模型组,存在显著性差异(P<0.01),但干预组心肌组织GAPDH活性低于空白组,差异显著(P<0.01)。7.大鼠心肌组织CS活性比较:模型组的大鼠心肌组织CS活性明显低于空白组,存在显著性差异(P<0.01);干预组的大鼠心肌组织CS活性明显高于模型组,存在显著性差异(P<0.01),但干预组心肌组织CS活性低于空白组,差异显著(P<0.01)。8.大鼠心肌线粒体CCO活性比较:模型组的大鼠心肌线粒体CCO活性明显低于空白组,存在显著性差异(P<0.01);干预组的大鼠心肌线粒体CCO活性明显高于模型组,存在显著性差异(P<0.01),但干预组心肌线粒体CCO活性低于空白组,差异显著(P<0.01)。9.心肌线粒体RCR、心肌组织GAPDH、CS、CCO活性与心肌组织ATP含量相关分析:大鼠心肌组织ATP与心肌线粒体RCR、心肌组织GAPDH、CS、CCO活性之间存在线性相关,具有统计学意义,R2分别为0.886、0.942、0.908及0.949。结论1.使用连续注射ISO的方法可以成功诱建大鼠慢性心肌缺血模型,且操作简便、可控、成功率高。2.“标本配穴”电针干预能够改善实验大鼠心脏的心电活动及心肌组织形态学表达,防止心肌组织结构的破坏,修护心肌缺血性损伤,更对线粒体的结构与功能起到了良性的调节作用。3.“标本配穴”电针干预增加试验大鼠心肌细胞有氧呼吸相关酶的活性,提高心肌产能、提升心肌组织中ATP含量,增加对心肌组织的能量供应,从而对心肌组织起到了良性的调节作用。