HGF质粒诱导脐血干细胞向肝系细胞分化的研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shuo19871108
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第一部分 人脐血CD34~+造血干细胞的分离、纯化及鉴定 目的:探讨人脐血CD34~+造血干细胞的分离、纯化及鉴定方法。 方法:选择我院足月妊娠产妇,产前检查HBsAg和抗-HCV均阴性,收集其脐血。密度梯度离心分离单个核细胞,再通过免疫磁式分选法(magnetic activating cell sorting,MACS)收集CD34~+的造血干细胞。纯化得到的干细胞直接用于细胞移植,或加入冻存液后置于液氮中备用。应用流式细胞术分析检测CD34~+造血干细胞的表面标志。 结果:经密度梯度离心后,得到的MNC数约为每份脐血WBC的1/10。而每份MNC经纯化后,得到的CD34~+细胞数约为起始细胞数的1/100。流式细胞仪检测MNC和经纯化后CD34~+细胞的含量,每份标本CD34~+细胞的回收率波动于17.8~24.1%,其平均值为20.7%。纯化的人脐血CD34~+细胞经流式细胞仪检测,CD34~+阳性百分率均值为92%,最高为98%。 结论:通过免疫磁式分选法可从人脐血中筛选出高纯度的CD34~+造血干细胞。 第二部分 HGF质粒尾静脉注射促使体内高表达 目的:采用质粒尾静脉快速输注获得HGF小鼠体内高表达。 方法:抽提扩增HGF质粒,并酶切鉴定。将不同剂量的HGF质粒通过尾静脉快速注入6-8周的NOD/SCID小鼠体内,ELISA法检测
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