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背景及目的:
变应性疾病的特异性免疫治疗(SIT)已成为变应性疾病治疗的重要方法,这种治疗方法可以改变变应性疾病病程,阻止症状的恶化和防治对新的变应原产生过敏,故被认为是目前唯一病因治疗方法,也是一种病因预防手段。在传统的特异性免疫治疗中,天然变应原提取物的应用存在诸多隐患。首先,应用于特异性变应原免疫治疗的天然提取物中存在其它非致敏蛋白和大分子,从而使应用时的计量很难标准化;其次,所获得的天然变应原有较强的致敏性,在治疗的过程中存在一定的危险。由于以上两种情况的存在使得临床应用的剂量很低,很难达到免疫治疗的效果。此外,治疗的时间长达3~5年并且疗效不确切,影响了患者治疗的依从性。
因此需要一种新的免疫治疗方法来克服上述不足,缩短治疗时间,提高临床效果。国外对此进行的大量研究,主要集中在:变应原的遗传改良即获得低变应原性变应原)。目前获得低变应原性变应原的方法有:变应原低聚体法、ISS-ODN-偶联变应原(ISS-ODN)法等。特别是ISS-ODN-偶联变应原法,在基因治疗的安全性受到挑战的今天,显示了更为广阔的应用前景。
近年来对变应原低聚体和ISS-ODN-偶联变应原的研究已经取得了很大进展,但对变应原低聚体与ISS-ODN-偶联变应原低聚体整合后的复合体功能的研究尚不多见,构建了变应原低聚体Monomer、Dimer、Trimer及ISS-ODN偶联变应原低聚体的整合后的复合体。预期这种新的复合物的免疫治疗效果将会更好,而其安全性将得到进一步提高。这将为变应原低变应原性的遗传改良提供新的方向。
方法:
1.研究对象:变应性鼻炎(AR)患者:均为临床确诊的变应性鼻炎患者(符合海口标准)。对照组:健康志愿者,经问诊无变应性疾病史。
2.人外周血单个核细胞(PBMC)的提取(Ficoll密度梯度离心法)。
3.变应原低聚体Monomer,Dimer,Trimer三个蛋白的表达与纯化。
4.ISS-ODN的合成。
5.ISS-ODN-偶联Monomer,ISS-ODN-偶联Dimer,ISS-ODN-偶联Trimer的制备。
6.功能鉴定。
结论:
1)构建了变应原低聚体基因,通过表达、纯化、偶联,获得了变应原低聚体及其ISS-ODN偶联复合物。这为变应原的遗传改良即获得低变应原性变应原提供了一个新的方向。
2)功能鉴定结果显示:变应原低聚体及其ISS-ODN偶联复合物具有变应性疾病的免疫治疗作用。