目的：毛细血管扩张-运动共济失调症(ataxia-telangiectasia，A-T)细胞因ATM基因功能失活，导致AT细胞出现辐射诱发DNA双链断裂发生率和细胞凋亡率的增加。人拓扑异构酶Ⅲ(human topoisomeraseⅢ，hTOP3)基因具有介导DNA损伤修复的功能。本课题通过构建hTOP3反义真核表达载体，转染AT细胞，观察AT细胞中hTOP3内源性表达水平的改变；研究其对电离辐射诱发的AT细胞DNA损伤修复能力和细胞凋亡率的影响；探讨hTOP3基因对AT细胞DNA损伤修复能力和细胞凋亡影响的作用机理。 方法：(1)构建hTOP3的反义真核表达载体pcDNA3.0-antihTOP3；(2)应用电穿孔方法，分别将pcDNA3.0-antihTOP3反义真核表达载体和pcDNA3.0空载体转染进AT细胞，获得hTOP3—AT和pcDNA3.0—AT细胞，RT—PCR测定AT细胞中hTOP3 mRNA的表达量；(3)应用单细胞凝胶电泳，观察电离辐射诱发hTOP3—AT、pcDNA3.0—AT和AT细胞的DNA损伤、修复；(4)应用Annexin V／PI双染流式细胞仪检测电离辐射诱发hTOP3—AT、pcDNA3.0—AT和AT细胞的凋亡率。 结果：(1)测序表明构建的hTOP3反义真核表达载体pcDNA3.0-antihTOP3含有全长为3.66kb的反义hTOP3全基因序列；(2)反义hTOP3表达载体能降低AT细胞内源性的hTOP3表达量，而转染的pcDNA3.0空载体对AT细胞内源性hTOP3表达量没有影响；(3)反义hTOP3表达载体能够降低电离辐射诱发AT细胞的DNA损伤程度，并且有效提高AT细胞对DNA损伤的修复。而pcDNA3.0空载体对电离辐射诱发AT细胞的DNA损伤、修复没有影响；(4)反义hTOP3表达载体可以降低电离辐射诱发AT细胞的细胞凋亡率。同样，pcDNA3.0空载体对电离辐射诱发AT细胞凋亡率没有影响。反义h丁OP3对A!细胞内源性hTOP3的表达、DNA损伤修复、凋亡的彭响研究中文摘要结论:转染的反义hTOP3表达载体通过部分降低AT细胞内源性的hTOP3表达量，降低电离辐射诱发AT细胞的DNA损伤程度，有效提高AT细胞对电离辐射诱发DNA损伤的修复能力，降低电离辐射诱发AT细胞凋亡率。表明在AT细胞中hTOP3对DNA损伤、修复、细胞凋亡的作用不受ATM基因的调控。提示hTOP3基因可能通过改变AT细胞的DNA构象来影响其与损伤修复复合物的结合，或者通过促进其他非ATM介导的DNA损伤信号传导通路，对电离辐射诱发的DNA损伤进行修复。