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目的研究NLK与c-Myb在乳腺癌中的表达以及NLK对c-Myb的调节作用在乳腺癌发生发展中的作用。方法1.为了研究NLK在乳腺癌组织学水平的表达,本研究通过western blot技术检测8例乳腺癌及癌旁新鲜冰冻组织中NLK及c-Myb的表达情况；采用免疫组化方法检测62例乳腺癌及癌旁组织石蜡切片中NLK、c-Myb和增殖指标Ki67的表达情况,并结合乳腺癌癌临床病理资料分析NLK及c-Myb与乳腺癌患者的年龄、性别、肿瘤分级、转移以及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、增殖指标等因素之间的关系。2.为了研究NLK在乳腺癌细胞学水平的表达,本研究通过采用正常乳腺上皮细胞HBL-100及乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中用western blot技术检测NLK及c-Myb的表达情况；采用血清饥饿释放同步化处理MCF-7细胞,用流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的变化,western blot技术检测在此过程中NLK和c-Myb的表达变化；在此基础上,对乳腺癌细胞株MCF-7进行NLK的转染过表达,用western blot技术检测增殖指标PCNA及凋亡指标caspase-3的表达变化,用MTT检测细胞活性,用流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡变化。对乳腺癌细胞株MCF-7进行NLK的转染过表达,用western blot技术检测c-Myb发生蛋白酶体依赖的降解,及其下游靶分子c-myc及bcl-2的蛋白表达情况。明确NLK对c-Myb的调节在乳腺癌细胞的增殖及凋亡中的影响。结果1.免疫组化及western blot分析显示,NLK在乳腺癌组织中的表达明显低于对应的癌旁乳腺组织,而c-Myb在乳腺癌中的表达明显高于对应的癌旁乳腺组织。NLK的表达强度与乳腺癌组织学分级(p<0.001)、Her2(p=0.029)、Ki67(P<0.001)之间的关系有统计学意义,c-Myb的表达强度与Ki67(P<0.001)之间的关系有统计学意义。相关性分析表明NLK与Ki67表达呈负相关(r2=-0.743;p<0.001)。2.应用western blot分析显示在正常乳腺上皮细胞HBL-100及乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7中,在MCF-7细胞中NLK表达最低而c-Myb表达最高。血清饥饿造成MCF-7细胞生长周期停滞,NLK蛋白表达升高,c-Myb蛋白表达降低。血清释放后刺激MCF-7细胞增殖,上述分子呈现相反的变化。对NLK表达最低的乳腺癌细胞MCF-7进行了NLK转染过表达后,发现NLK能够抑制MCF-7细胞的增殖,另一方面促进其凋亡。对乳腺癌细胞株MCF-7进行NLK的转染过表达后,结果显示c-Myb有蛋白酶体依赖的降解,并且它的下游靶分子c-myc及bcl-2具有蛋白水平的下调。结论1.NLK在正常乳腺中高表达,在乳腺癌中低表达,可作为乳腺癌患者诊断指标,提示NLK可能与乳腺癌的发生发展相关。2.在乳腺癌细胞MCF-7细胞的增殖及凋亡过程中,NLK对c-Myb的调节作用在其中发挥作用。